A principal diferença entre cromatofocagem e focagem isoelétrica é que a cromatofocagem é um tipo de método de cromatografia em coluna que utiliza resinas de troca iônica, enquanto a focagem isoelétrica é um tipo de técnica de eletroforese que utiliza géis de gradiente de pH imobilizados.
A cromatofocagem e a focagem isoelétrica são duas técnicas que separam as proteínas de acordo com seus pontos isoelétricos. Tanto a focagem cromato quanto a focagem isoelétrica têm grande poder de resolução. A cromatofocagem é um método de cromatografia em coluna de alta resolução, enquanto a focagem isoelétrica é um método de separação eletroforética. Além disso, a focagem cromato não usa um campo elétrico enquanto a focagem isoelétrica precisa de um campo elétrico.
O que é Cromatofocagem?
Chromatofocusing é um tipo de cromatografia de alta eluição que separa proteínas de acordo com diferenças em seu ponto isoelétrico. Ele usa uma coluna de resina de troca iônica e um gradiente de pH desenvolvido internamente. Ao contrário da focagem isoelétrica, a cromatofocagem não envolve um campo elétrico. A cromatofocagem é uma técnica de purificação poderosa que pode resolver moléculas altamente semelhantes, mesmo diferindo apenas em 0,02 unidades de pH. Portanto, a focagem cromática é mais adequada como uma etapa final de polimento quando é necessária alta resolução para separar componentes muito semelhantes.
Na cromatofocagem, a amostra é aplicada à coluna misturando-a com o buffer inicial. Proteínas que estão em pH acima de seu ponto isoelétrico são carregadas negativamente e permanecem próximas ao topo da coluna, enquanto outras proteínas que estão em pH abaixo de seu ponto isoelétrico migram pela coluna. A proteína com o ponto isoelétrico mais alto é eluída primeiro, enquanto a proteína com o ponto isoelétrico mais baixo é eluída por último da coluna. Esta técnica é afetada por vários fatores, como precipitação de proteínas e linearidade do gradiente de pH.
O que é Focagem Isoelétrica?
Focalização isoelétrica é uma técnica que separa diferentes moléculas com base em seu ponto isoelétrico. Também é conhecido como eletrofocagem. Esta técnica é frequentemente usada para separação de proteínas em um gel. Na focagem isoelétrica, a amostra é adicionada em géis de gradiente de pH imobilizado (IPG). O gel IPG é uma matriz de gel de acrilamida copolimerizada com um gradiente de pH. As proteínas migram em direção ao cátodo até encontrarem a região de pH de seus pontos isoelétricos. Quando uma proteína atinge o pH que não tem carga líquida, a migração cessa e dá uma banda estacionária. Da mesma forma, cada proteína dá uma banda em um ponto do gradiente de pH correspondente ao seu ponto isoelétrico.
Figura 01: Focagem Isoelétrica
Focalização isoelétrica é o primeiro passo da eletroforese em gel bidimensional. Nessa técnica, as proteínas são primeiramente separadas de acordo com seus pontos isoelétricos por focagem isoelétrica e depois separadas por seu peso molecular por meio de SDS-PAGE.
Quais são as semelhanças entre cromatofocagem e focagem isoelétrica?
- A focagem cromato e a focagem isoelétrica são dois métodos de alta resolução.
- Ambos são baseados no ponto isoelétrico das proteínas.
- Essas técnicas usam um gradiente de pH.
- Ambos os procedimentos são informativos para a caracterização de variantes de hemoglobina humana.
- Eles podem resolver moléculas onde os valores de pI diferem em apenas 0,02 unidades de pH.
Qual é a diferença entre cromatofocagem e focagem isoelétrica?
Chromatofocusing é uma técnica de cromatografia em coluna de alta resolução que separa as proteínas de acordo com seu ponto isoelétrico. Em contraste, a focagem isoelétrica é uma técnica eletroforética que separa as proteínas de acordo com seu ponto isoelétrico pela aplicação de um campo elétrico ao longo de um gradiente de pH formado em um capilar. Então, esta é a principal diferença entre focagem cromato e focagem isoelétrica.
Outra diferença entre a focagem cromática e a focagem isoelétrica é que a focagem cromato não envolve um campo elétrico, enquanto a focagem isoelétrica precisa de um campo elétrico.
Resumo – Cromatofocagem vs Focagem Isoelétrica
Cromatofocagem e focagem isoelétrica são duas técnicas semelhantes que possuem alta capacidade de resolução de moléculas, especialmente moléculas muito semelhantes. A cromatofocagem é uma técnica de cromatografia em coluna de alta resolução, enquanto a focagem isoelétrica é um método de eletroforese. A cromatofocagem não envolve um campo elétrico, ao contrário da focagem isoelétrica. Assim, isso resume a diferença entre cromatofocagem e focagem isoelétrica.
