Diferença chave – RNASE A vs RNASE H
As ribonucleases são nucleases que degradam especificamente o RNA em unidades menores. Eles podem ser divididos em duas categorias; endoribonucleases e exoribonucleases. A endoribonuclease é uma endonuclease que pode degradar RNA de fita simples ou de fita dupla. Ele cliva as ligações fosfodiéster dentro de uma cadeia polinucleotídica de RNA. Os exemplos são RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P e RNase H. A exoribonuclease é uma exonuclease que degrada o RNA removendo nucleotídeos terminais da extremidade 5' ou da extremidade 3' da molécula de RNA. Os exemplos são RNase R, RNase II, RNase D e RNase PH. A principal diferença entre RNASE A e RNASE H é que a RNase A é uma ribonuclease pancreática que degrada especificamente o RNA de fita simples em componentes menores, enquanto a RNase H é uma enzima não específica que cliva o RNA no híbrido RNA-DNA em unidades menores via o mecanismo hidrolítico.
O que é RNASE A?
A RNase A é uma ribonuclease pancreática que cliva especificamente os resíduos de citosina e uracil não pareados na extremidade 3' do RNA de fita simples. A RNase H funciona em uma concentração de sal mais alta (concentração de NaCl 0,3 M ou mais alta). A reação hidrolítica é de duas etapas. Forma um produto fosforilado 3' via intermediário monofosfato cíclico 2', 3'. Embora seja específico para RNA de fita simples em maior concentração de sal, ele também pode degradar RNA de fita dupla e RNA em híbrido de RNA-DNA em menor concentração de NaCl (menor que 0,3M NaCl).
Bruce Merrifield primeiro sintetizou esta enzima. A RNase A é uma enzima muito popular na pesquisa molecular. A RNase A pancreática bovina é um exemplo de RNase A. E é uma das enzimas mais resistentes usadas em laboratório. Esta enzima não necessita de um cofator para sua atividade. É uma enzima altamente termoestável. A RNase A é a primeira enzima e a terceira proteína para a qual foi detectada uma sequência de aminoácidos correta. Esta enzima é muito pequena com 124 aminoácidos e massa molecular de 12600da. E tem quatro resíduos de histidina (His 12 e His 119 que envolvem reação catalítica).
Figura 01: A RNase A
RNase A pode ser isolada fervendo uma amostra bruta. Quando ferve, todas as outras enzimas degradam a RNase A remanescente. A RNase A é uma enzima incrivelmente estável. Esta enzima inibe com a proteína inibidora da ribonuclease, complexos de metal pesado e vanadato de uridina.
O que é RNase H?
A RNase H é uma enzima ribonuclease inespecífica que pode degradar RNA em híbrido RNA-DNA via reação hidrolítica. A RNase H cliva a ligação 3'-O-P do RNA em um híbrido RNA-DNA. Em última análise, produz produtos terminados em 3'OH e 5' fosfato. Na replicação do DNA, ele desempenha um papel fundamental ao remover o primer de RNA após a formação de novas fitas de DNA. Em condições de laboratório, degrada especificamente o RNA no híbrido RNA-DNA, mas não o DNA e o RNA não hibridizado. E esta enzima é geralmente usada para destruir o molde de RNA após a primeira fita complementar de DNA ser formada durante a síntese de cDNA.
Figura 02: RNase H
RNase H também usa em ensaios de proteção de nuclease. Também pode ser incorporado à remoção da cauda poli A do mRNA. A RNase H tem a capacidade de destruir o RNA não codificante dentro e fora da célula. Os íons metálicos são necessários como cofatores para essa atividade proteica. Um quelante (EDTA) pode ser usado para inibir a enzima RNase H.
Quais são as semelhanças entre RNASE A e RNASE H?
- Ambos são de natureza proteica.
- Ambos são endoribonuclease
- Ambos podem degradar RNA.
- Ambos realizam reações hidrolíticas.
- Os laboratórios moleculares usam ambos.
Qual é a diferença entre RNASE A e RNASE H?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNase A é uma ribonuclease pancreática que cliva especificamente a extremidade 3' de resíduos de citosina e uracil não pareados de RNA de fita simples em maior concentração de sal. | RNase H é uma enzima ribonuclease inespecífica que pode degradar RNA em híbrido RNA-DNA via reação hidrolítica. |
| Natureza da Clivagem de RNA | |
| RNase A cliva especificamente RNA de fita simples em maior concentração de sal. | RNase H cliva o RNA no híbrido RNA-DNA. |
| Necessidade de cofatores para a atividade | |
| RNase A não precisa de cofatores para sua atividade. | RNase H precisa de íons metálicos como cofatores para sua atividade. |
| Inibidores da Atividade Proteica | |
| Proteína inibidora de ribonuclease, complexos de metal pesado e vanadato de uridina inibem a atividade da RNAse A. | Um quelante (EDTA) inibe a atividade da RNase H. |
| Remoção de primer de RNA na replicação de DNA | |
| RNase A não é usada para remoção de primer de RNA na replicação de DNA. | RNase H é usado para remoção de primer de RNA na replicação de DNA |
| Remoção do modelo de DNA na síntese de DNA complementar (C-DNA) | |
| RNase A não é usada para a remoção do molde de RNA durante a síntese de DNA complementar (C-DNA). | RNase H é usado para a remoção do molde de RNA durante a síntese de DNA complementar (C-DNA). |
| Remoção de Poly-A-Tail em mRNA hibridizado com oligo (dt) | |
| RNase A não é usada para remover “cauda poli-A” no mRNA hibridizado com oligo (dt). | RNase H é usado para remover "cauda poli-A" no mRNA hibridizado com oligo (dt) |
Resumo – RNASE A vs RNASE H
As ribonucleases são enzimas nuclease que têm a capacidade de clivar o RNA em unidades menores. São dois tipos; endoribonucleases e exoribonucleases. A endoribonuclease é uma endonuclease que tem a capacidade de degradar RNA de fita simples ou de fita dupla. E cliva a ligação fosfodiéster dentro de uma cadeia polinucleotídica de RNA. RNase A e RNase H são duas endoribonucleases. A RNase A é uma ribonuclease pancreática que cliva especificamente resíduos de citosina e uracil não pareados na extremidade 3' do RNA de fita simples em maior concentração de sal. A RNase H é uma enzima ribonuclease não específica que pode degradar o RNA no híbrido RNA-DNA via reação hidrolítica. Esta é a diferença entre RNase A e RNase H.
Baixe o PDF RNASE A vs RNASE H
Você pode baixar a versão em PDF deste artigo e usá-lo para fins offline conforme nota de citação. Baixe a versão em PDF aqui Diferença entre RNASE A e RNASE H
