A principal diferença entre ELISA competitivo e não competitivo é que o ELISA competitivo usa um antígeno de inibição, enquanto o ELISA não competitivo não usa um antígeno de inibição para o ensaio.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) é um ensaio imunológico que detecta vários alvos, como anticorpos, antígenos, proteínas e glicoproteínas. É um método rápido e simples de executar. Por isso, é mais frequentemente usado para fins de pesquisa e diagnóstico. O ELISA envolve o uso de enzimas e a ligação específica de anticorpo e antígeno. Com base em como as reações ocorrem, existem quatro tipos de ELISA: ELISA direto, ELISA indireto, ELISA sanduíche e ELISA de inibição. ELISA direto, indireto e sanduíche são tipos de ELISA não competitivos, enquanto o ELISA de inibição é um tipo de ELISA completivo. O objetivo principal deste artigo é discutir a diferença entre ELISA competitivo e não competitivo.
O que é ELISA Competitivo?
Competitive ELISA mede a concentração de antígeno em uma amostra através da detecção de interferência de sinal. Aqui, o ensaio usa um antígeno inibidor. Portanto, é um tipo de ELISA de inibição. Durante este procedimento, os antígenos presentes na amostra competem com o antígeno de referência selecionado para se ligar a uma quantidade específica de anticorpo marcado. Além disso, este procedimento inicia-se com a incubação da amostra, com a quantidade em excesso de anticorpo marcado. Além disso, o antígeno de referência deve ser pré-revestido em uma placa de ensaio de múltiplos poços. Em seguida, a mistura da amostra deve ser adicionada à placa de ensaio que contém o antígeno de referência. Os anticorpos livres se ligarão ao antígeno de referência dependendo da quantidade de antígeno na amostra. Portanto, se mais antígeno de amostra estiver presente, menos antígeno de referência será detectado. Assim, cria um sinal mais fraco.
Figura 01: ELISA
Em contraste, quando a amostra contém menos quantidade de antígeno, mais e mais antígeno de referência ocupará os anticorpos e dará um sinal forte. Como o ELISA competitivo fornece um sinal mais forte quando a amostra contém uma pequena quantidade de antígenos, o ELISA competitivo é um ensaio muito sensível, mesmo para amostras com um pequeno número de antígenos.
Em alguns kits ELISA competitivos, um antígeno marcado é usado em vez de um anticorpo marcado. Aqui, o antígeno marcado e o antígeno da amostra competirão pela ligação ao anticorpo primário. Da mesma forma, quando a quantidade de antígeno na amostra é baixa, a quantidade de antígeno marcado que se liga aos anticorpos será maior e criará um sinal mais forte.
O que é ELISA não competitivo?
Entre os quatro tipos de ELISA, três tipos são ELISA não competitivos. Eles são ELISA direto, ELISA indireto e ELISA sanduíche. Todos os três formatos funcionam sob o princípio comum de ELISA com pequenas diferenças em suas metodologias.
Direct ELISA usa um anticorpo primário marcado com enzima. Portanto, não requer um anticorpo secundário. Portanto, o ELISA direto é mais rápido que outros tipos de ELISA. O anticorpo primário irá se ligar diretamente ao antígeno alvo imobilizado que está presente na placa. Assim, a reação enzima-substrato ocorrerá, produzindo um sinal visível.
Figura 02: ELISA sanduíche
Ao contrário do ELISA direto, o ELISA indireto usa um anticorpo primário não marcado e um anticorpo secundário marcado com enzima. Uma vez que o anticorpo primário se liga ao antígeno imobilizado, o anticorpo secundário se liga ao anticorpo primário. A enzima no anticorpo secundário reagirá com o antígeno e produzirá um sinal visível. O ELISA sanduíche é diferente do ELISA direto e indireto. Aqui, o anticorpo é imobilizado na parede da placa de ensaio.
Quais são as semelhanças entre ELISA competitivo e não competitivo?
- ELISA competitivo e não competitivo são dois tipos de técnicas de ensaio imunoabsorvente.
- São técnicas altamente flexíveis e sensíveis.
- Além disso, tanto o ELISA competitivo quanto o não competitivo são imunoensaios enzimáticos.
- Além disso, ambos os métodos geram um sinal devido a uma reação enzima-substrato.
Qual é a diferença entre ELISA competitivo e não competitivo?
O ELISA competitivo é um tipo de ELISA que se baseia na conclusão entre o antígeno analito e o antígeno marcado para uma quantidade limitada de anticorpo específico. Por outro lado, não existe tal competição entre o antígeno de interesse e o antígeno de referência em ELISA não competitivo. Assim, esta é a principal diferença entre ELISA competitivo e não competitivo. Da mesma forma, o ELISA competitivo é um ELISA de inibição, enquanto o ELISA não competitivo não é um ELISA de inibição. Portanto, essa também é uma diferença entre ELISA competitivo e não competitivo.
Além disso, o ELISA competitivo é mais adequado para medir uma pequena quantidade de antígeno de interesse. É um método sensível. Por outro lado, o ELISA não competitivo não depende do número de antígenos presentes em uma amostra. Portanto, essa também é uma diferença entre ELISA competitivo e não competitivo.
O infográfico abaixo explica a diferença entre ELISA competitivo e não competitivo comparativamente.
Resumo – ELISA Competitivo vs Não Competitivo
ELISA competitivo e não competitivo são os dois principais tipos de ELISA ou ensaios imunoenzimáticos. Ao resumir a diferença entre ELISA competitivo e não competitivo, o ELISA competitivo baseia-se na competição entre o antígeno de interesse e o antígeno de referência em relação à quantidade limitada de anticorpos. Portanto, o ELISA competitivo também é denominado ELISA de inibição. Por outro lado, o ELISA não competitivo não depende da competição entre antígenos alvo e antígenos de referência. Ele usa um excesso de anticorpo específico marcado para o analito de interesse. Assim, esta é a principal diferença entre ELISA competitivo e não competitivo. ELISA direto, ELISA indireto e ELISA sanduíche são os três principais tipos de ELISA não competitivo.
