A principal diferença entre o Elisa e o Elispot é que o Elisa é um ensaio imunoenzimático que determina a concentração total de proteínas sinalizadoras secretadas, enquanto o Elispot é um ensaio imunoenzimático que detecta células secretoras de citocinas individuais.
Elisa e Elispot são dois ensaios imunoenzimáticos amplamente utilizados em medicina, fitopatologia, biotecnologia e diversas indústrias farmacêuticas. Nestas técnicas, um analito de proteína é detectado por um anticorpo dirigido contra ele. Elisa é o ensaio imunossorvente enzimático mais popular usado em laboratórios. Por outro lado, o Elispot é um ensaio imunoenzimático que não é usado no lugar do Elisa, mas sim em conjunto com o Elisa em laboratórios.
O que é o Ensaio Elisa?
Elisa é um ensaio imunoenzimático que determina a concentração total de proteínas sinalizadoras secretadas. É um ensaio bioquímico analítico amplamente utilizado que foi descrito pela primeira vez por Engvall e Perlmann em 1971. Essa técnica usa um tipo de imunoensaio enzimático de fase sólida para detectar a presença de uma proteína específica em uma amostra líquida usando anticorpos direcionados contra essa proteína específica. Este ensaio é uma ferramenta de diagnóstico comumente usada em medicina, patologia vegetal e biotecnologia.
Mecanismo do Teste ELISA
Na maioria dos testes de ELISA, uma quantidade desconhecida de antígeno é imobilizada em um suporte sólido (placa de microlitro) no início. Em seguida, o anticorpo primário correspondente é aplicado sobre a superfície de suporte sólida. Este anticorpo forma um complexo com o antígeno (complexo antígeno-anticorpo). O anticorpo primário ligado ao antígeno pode ser detectado por um anticorpo secundário que está ligado a uma enzima por meio de bioconjugação. Na etapa final do teste Elisa, é adicionada uma substância contendo o substrato da enzima. Se houver uma ligação adequada de um anticorpo primário ao antígeno, uma mudança de cor detectável é produzida pelo substrato. Em última análise, isso quantifica o antígeno na amostra.
Figura 01: Diferentes tipos de Elisa
Além disso, existem diferentes abordagens para Elisa, como Elisa direta e Elisa indireta. Atualmente, vários testes Elisa são usados para detectar patógenos humanos como Mycobacterium tuberculosis, rotavírus, vírus da hepatite B, vírus da hepatite C, E.coli produtora de enterotoxina, HIV e SARS-CoV-2.
O que é o Ensaio Elispot?
Elispot é um ensaio imunoabsorvente ligado a enzimas que detecta células secretoras de citocinas individuais. Cecil Czerkinsky descreveu o ELISpot pela primeira vez em 1983. É um tipo de ensaio que se concentra em medir quantitativamente a frequência de secreção de citocinas para uma única célula. Também é classificada como uma técnica que utiliza anticorpos para detectar um analito proteico biológico ou químico. O ensaio Fluorospot é uma variação do ensaio Elispot, que usa fluorescência para analisar múltiplos analitos (proteínas mais secretas).
Mecanismo do Teste Elispot
Neste mecanismo, anticorpos monoclonais específicos para citocinas são adicionados inicialmente aos poços das placas de microlitro. Em seguida, as células desejadas que estão sendo observadas são adicionadas aos poços. Mais tarde, as células são incubadas. Durante a incubação das células, as células podem reagir a qualquer estímulo e secretar citocinas. As citocinas que foram secretadas pelas células incubadas se ligarão aos anticorpos, uma vez que as células estão cercadas por anticorpos monoclonais específicos para citocinas.
Figura 02: Ensaio Elispot
Para detectar esses anticorpos monoclonais específicos de citocinas, anticorpos de detecção específicos biotinilados são adicionados ao poço. Os anticorpos de detecção específicos biotinilados capturam os anticorpos monoclonais específicos da citocina nos poços. Além disso, conjugados estreptavidina-enzima são adicionados aos poços para se ligarem aos anticorpos de detecção. Na etapa final, substratos específicos são adicionados aos poços. As reações de conjugados enzimáticos e substratos produzem manchas distintas nos poços. Esses pontos distintos são lidos em um leitor ELISpot automatizado. Em última análise, isso calculará ainda mais a frequência de secreção de citocinas.
Quais são as semelhanças entre Elisa e Elispot?
- Ambos são ensaios imunoabsorventes ligados a enzimas.
- Ambos os ensaios detectam analitos de proteínas específicos.
- Esses ensaios usam anticorpos específicos para identificar os analitos de proteína.
- Ambos os ensaios usam enzimas e substratos.
- Eles são usados como ferramenta de diagnóstico em laboratórios médicos.
Qual é a diferença entre Elisa e Elispot?
Elisa é um ensaio imunoenzimático que determina a concentração total de proteínas sinalizadoras secretadas. Por outro lado, Elispot é um ensaio imunossorvente ligado a enzimas que mede células secretoras de citocinas individuais. Então, esta é a principal diferença entre Elisa e Elispot. Além disso, no teste Elisa, o antígeno é primeiramente imobilizado nos poços de microlitros. Em contraste, no teste Elispot, o anticorpo é primeiramente imobilizado nos poços de microlitro. Assim, esta é outra diferença entre Elisa e Elispot.
O infográfico abaixo apresenta uma análise detalhada da diferença entre Elisa e Elispot em forma de tabela.
Resumo – Elisa vs Elispot
Elisa e Elispot são dois ensaios imunoenzimáticos amplamente utilizados em medicina, fitopatologia, biotecnologia e diferentes indústrias farmacêuticas. Elisa detecta a presença de um ligante (proteína) em uma amostra líquida usando anticorpos direcionados contra o ligante a ser medido. O ensaio Elispot é um método amplamente utilizado para monitorar as respostas imunes. Ele detecta células secretoras de citocinas individuais usando anticorpos. É uma técnica de imunoensaio e bioensaio. Assim, este é o resumo da diferença entre Elisa e Elispot.
