Key Difference – ELISA direto vs indireto
Um imunoensaio enzimático (ELISA), também conhecido como imunoensaio enzimático, é um teste sorológico que detecta anticorpos no sangue. É usado como ferramenta de diagnóstico para descobrir se o paciente foi exposto a um determinado tipo de vírus ou outro agente infeccioso (antígeno) e se o organismo produziu anticorpos contra a infecção. O ELISA também pode identificar as infecções passadas e atuais. Portanto, o ELISA é frequentemente usado como teste de pré-triagem pelos médicos antes da análise aprofundada das doenças. Este teste pode ser realizado em laboratório, retirando uma amostra de sangue do paciente. Existem dois tipos de teste ELISA: ELISA direto e ELISA indireto. A principal diferença entre ELISA direto e indireto é que o ELISA indireto é mais sensível e requer a adição de um anticorpo secundário, enquanto o ELISA direto é menos sensível e usa apenas um anticorpo primário.
O que é ELISA direto?
ELISA é um teste de diagnóstico de doenças realizado para identificar a presença de determinados antígenos ou anticorpos no sangue. É feito como um ensaio de placa. Ele usa anticorpos ligados a enzimas facilmente ensaiadas. A presença de antígenos na amostra de soro se liga a anticorpos específicos ligados a enzimas. Na etapa final, um substrato específico é adicionado para reagir com a enzima. A enzima converte o substrato em um produto colorido ou produtor de sinal. A mudança de cor no substrato químico revela a presença de um determinado anticorpo na amostra de soro. O teste ELISA direto usa apenas um anticorpo primário ligado à enzima. Ao se ligar ao antígeno, muda rapidamente de cor, indicando a presença do agente infeccioso no sangue. No entanto, a intensidade dos sinais é mais fraca no ELISA direto, uma vez que os epítopos são limitados à ligação dos antígenos. Portanto, o ELISA direto é menos sensível em comparação com o ELISA indireto.
Figura 01: Teste ELISA Direto
O que é ELISA indireto?
ELISA pode ser realizado usando dois tipos de anticorpos a saber; anticorpo primário e anticorpo secundário. A ferramenta ELISA indireta usa os dois tipos de anticorpos para amplificar os sinais para uma melhor detecção. A técnica ELISA indireta é realizada da seguinte forma.
- As placas são incubadas com antígenos e lavadas para bloquear a ligação não específica.
- Em seguida, os anticorpos primários são adicionados e lavados.
- Anticorpos secundários ligados a enzimas são adicionados e lavados.
- Um substrato é adicionado e deixado reagir com enzimas.
- Sinais são detectados e a presença ou ausência do antígeno específico na amostra é identificada.
No teste ELISA indireto, vários anticorpos secundários podem se ligar a um único anticorpo primário. Os anticorpos secundários estão ligados a enzimas facilmente ensaiadas. Portanto, uma ligação pode fazer um sinal forte devido a mais de uma interação. Portanto, o ELISA indireto é mais sensível do que o ELISA direto. No entanto, o ELISA indireto pode produzir sinais inespecíficos devido a reações cruzadas dos anticorpos secundários.
Figura 02: Teste ELISA indireto
Qual é a diferença entre ELISA direto e indireto?
ELISA direto vs indireto |
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| O ELISA direto é menos sensível comparado ao ELISA indireto. | ELISA indireto é mais sensível. |
| Tempo gasto | |
| O teste ELISA direto é um processo rápido. | ELISA indireto é demorado. |
| Uso de Anticorpos | |
| Apenas um tipo de anticorpos (anticorpos primários) são usados em ELISA direto. | Anticorpos primários e secundários são usados para ELISA indireto. |
| Link com Enzimas | |
| Os anticorpos primários estão ligados a enzimas. | Os anticorpos secundários estão ligados a enzimas. |
| Reatividade cruzada de segundos anticorpos | |
| O ELISA direto elimina a reatividade cruzada dos segundos anticorpos. | O ELISA indireto é afetado pela reatividade cruzada dos segundos anticorpos. |
| Sinais | |
| Os sinais são fracos em comparação com o ELISA indireto. | Sinais são amplificados em ELISA indireto. Portanto, é fácil de detectar. |
Resumo – ELISA direto vs indireto
ELISA é uma técnica bioquímica usada principalmente em imunologia para detectar a presença de um anticorpo ou antígeno em uma amostra de sangue de um paciente. Pode ser realizado através de dois processos conhecidos como ELISA direto ou indireto. O teste ELISA direto usa apenas anticorpos primários para detectar o antígeno, enquanto o ELISA indireto usa anticorpos primários e secundários. No ELISA direto, os anticorpos primários são marcados, enquanto no ELISA indireto os anticorpos secundários são marcados. Esta é a diferença entre ELISA direto e indireto.
