Key Difference – Marcador Selecionável vs Gene do Repórter
A técnica de engenharia genética é usada para transferir genes importantes de um organismo para outro organismo. A inserção de um gene estranho no genoma de outro organismo e sua expressão dentro da célula hospedeira são as etapas mais difíceis na transferência de genes. Para detectar o sucesso do processo de transformação, um marcador selecionável e um gene repórter são usados na molécula recombinante. Um marcador selecionável é uma sequência de DNA ou um gene que expressa e seleciona as células transformadas das células não transformadas. Um gene repórter é outro gene que é usado para distinguir células transformadas e para quantificar ou detectar como o gene inserido funciona dentro do hospedeiro. A principal diferença entre o marcador selecionável e o gene repórter é que o marcador selecionável é usado para rastrear as células não transformadas e sinalizar as células transformadas enquanto o gene repórter é usado para quantificar o nível de expressão gênica dentro do hospedeiro.
O que é um marcador selecionável?
Na engenharia genética, o gene de interesse é inserido em um vetor adequado e transformado em organismos hospedeiros. No entanto, a transformação é bem sucedida apenas nas células hospedeiras competentes, e existe a possibilidade das células hospedeiras rejeitarem a captação de DNA estranho. Portanto, a diferenciação das células transformadas e não transformadas é importante para continuar com mais experimentação. Assim, os pesquisadores incorporam um gene marcador selecionável ao vetor para facilitar a seleção das células transformadas de células não transformadas. Um marcador selecionável é uma sequência de DNA, especialmente um gene útil na identificação das células transformadas. Este gene marcador exibe uma característica que se adapta a uma seleção artificial de células transformadas de células não transformadas em um meio.
Os marcadores selecionáveis mais comuns usados em biologia molecular são genes resistentes a antibióticos. Um gene de resistência a antibióticos é inserido no vetor e transformado em células hospedeiras especialmente para a bactéria hospedeira. Esse antibiótico específico é incorporado ao meio de crescimento da bactéria. Devido à presença do marcador seletivo, nas condições seletivas, apenas as células que contêm o marcador selecionável apropriado podem sobreviver. As células não transformadas são incapazes de crescer no meio contendo antibiótico. Portanto, devido ao marcador selecionável que é resistente a antibióticos, as células transformadas são facilmente identificadas.
Genes que conferem características para antimetabólitos, herbicidas são usados como marcadores seletivos na clonagem de vetores em engenharia genética de plantas. No entanto, essa cotransformação de marcadores seletivos em organismos geneticamente modificados tem efeitos negativos sobre o meio ambiente e o ser humano. A liberação de bactérias resistentes a antibióticos pode aumentar a resistividade antibiótica de patógenos humanos. Pode contaminar o produto ou biomassa por antibióticos e pode perder a pressão seletiva como resultado da degradação e inativação dos antibióticos.
Figura 01: Vetor de plasmídeo para transferência de genes com marcador selecionável
O que é um Gene Repórter?
Genes repórter são genes que permitem a detecção ou medição da expressão do gene inserido. Esses genes repórteres podem ser anexados a sequências reguladoras do gene de interesse para sinalizar a localização ou os níveis de expressão. Portanto, durante a expressão de genes sob o mesmo promotor, eles são transcritos em uma única sequência de mRNA e depois traduzidos em uma proteína que pode indicar o nível de expressão gênica.
Os genes repórter são de vários tipos e contêm características visualmente identificáveis que geralmente estão envolvidas em proteínas fluorescentes e luminescentes. Os genes que codificam proteínas e enzimas fluorescentes convertem substratos invisíveis em produtos luminescentes ou coloridos, sinalizando a expressão gênica bem-sucedida e dando a oportunidade de quantificação da expressão gênica.
Figura 02: Expressão do Gene do Repórter
Qual é a diferença entre Selectable Marker e Reporter Gene?
Marcador Selecionável vs Gene do Repórter |
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| Marcador selecionável é um tipo de sequência de DNA que ajuda a distinguir células transformadas de células não transformadas. | Gene repórter é um gene que ajuda a quantificar a expressão do gene desejado inserido na célula hospedeira. |
| Natureza das Unidades Produzidas | |
| Os genes são codificados com características que auxiliam na seleção artificial em meios de cultivo. | Os genes são codificados com características visualmente identificáveis. |
| Uso | |
| Genes de resistência a antibióticos, genes antimetabólitos, genes de resistência a herbicidas, etc. são exemplos de marcadores selecionáveis. | Código de genes para proteína fluorescente verde, β-glucuronidase, Cloranfenicol acetiltransferase, proteína fluorescente vermelha, etc. são exemplos. |
Resumo – Marcador Selecionável vs Gene do Repórter
Marcadores selecionáveis permitem que as células transformadas cresçam em meios seletivos dosados com determinado antibiótico ou herbicida. Eles são usados para a seleção precoce de células transformadas. Os genes repórteres são usados para quantificar o nível de expressão do gene desejado inserido. Eles também permitem a diferenciação de células transformadas e não transformadas. Esta é a diferença entre o marcador selecionável e o gene repórter. Tanto o marcador selecionável quanto o gene repórter são considerados marcadores importantes na engenharia genética.
