PCR vs PCR em tempo real
PCR ou reação em cadeia da polimerase é uma descoberta revolucionária na biologia molecular moderna, que foi desenvolvida pela primeira vez pelo químico Kary Mullis em 1983. Ela permite que uma única sequência em um complexo de DNA seja amplificada para análise. A idéia básica da PCR é que dois primers, que são complementares às fitas opostas de uma sequência de DNA, são orientados um em direção ao outro; os primers produzem fitas complementares, cada uma contendo o outro primer. Assim, o resultado é uma grande quantidade de uma sequência correspondente ao DNA que se encontra entre os dois primers. A enzima DNA polimerase é usada para estender os primers na PCR. A DNA polimerase é uma enzima termoestável e tem a capacidade de sobreviver em altas temperaturas (94 a 95 °C) usada para desnaturação do DNA modelo.
A PCR envolve três etapas, a saber, rodadas repetidas de desnaturação, anelamento de primers e síntese de DNA. Uma máquina termocicladora é usada para realizar essa reação para que possa ser programada para alterar as temperaturas de forma rápida e precisa. As aplicações do PCR são investigações criminais, impressão digital de DNA, detecção de patógenos e análise de DNA de espécies humanas primitivas.
O que é PCR convencional?
Existem três estágios principais da PCR convencional, a saber; Etapa de amplificação de DNA, separação de PCR e detecção de produtos. A separação de segmentos de DNA é tipicamente feita por eletroforese em gel de agarose. Os produtos são então corados com brometo de etheiduim. Finalmente, a detecção é alcançada pela visualização de bandas em géis sob luz UV. Portanto, os resultados finais da PCR convencional não são expressos em números. Normalmente, a PCR convencional só é capaz de detectar um único parâmetro.
O que é PCR em tempo real?
PCR em tempo real pode detectar a amplificação de produtos, à medida que os produtos são sintetizados. Com o desenvolvimento da tecnologia, a PCR tornou-se uma técnica muito popular, principalmente para a detecção e identificação de bactérias em alimentos. A PCR em tempo real usa um sistema de corante fluorescente e termociclador equipado com capacidade de detecção de fluorescência.
Qual é a diferença entre PCR convencional e PCR em tempo real?
• A PCR convencional é mais demorada, pois usa eletroforese em gel para analisar os produtos de PCR amplificados. Em contraste, a PCR em tempo real consome menos tempo, pois pode detectar amplificações durante as fases iniciais da reação.
• A PCR em tempo real coleta dados na fase de crescimento exponencial da PCR enquanto a PCR tradicional coleta dados no ponto final da reação.
• Os resultados finais da PCR convencional podem não ser muito precisos, mas os resultados da PCR em tempo real são muito precisos.
• A PCR em tempo real é mais sensível que a PCR convencional.
• A PCR convencional tem resolução muito baixa, enquanto a PCR em tempo real pode detectar poucas alterações devido à alta resolução.
• A detecção de ponto final da PCR convencional tem uma faixa dinâmica curta, enquanto a detecção de PCR em tempo real tem uma faixa dinâmica ampla.
• Ao contrário da PCR convencional, as técnicas de detecção automatizadas são encontradas na PCR em tempo real.
• A PCR convencional é altamente sofisticada e exige mais trabalho do que a PCR em tempo real.
• Ao contrário da PCR em tempo real, a PCR convencional não pode discriminar entre bactérias mortas e vivas.
• A PCR em tempo real usa o sistema de corante fluorescente para detectar os produtos, enquanto a PCR convencional usa brometo de etídio e luz UV para visualizar as bandas no meio de gel de agarose.
