A principal diferença entre o híbrido de levedura um e o híbrido de levedura dois é que o híbrido de levedura um é um ensaio baseado in vitro para analisar interações DNA-proteína, enquanto o híbrido de levedura dois é um ensaio baseado in vitro para analisar interações proteína-proteína.
Estudar as interações entre as moléculas celulares pode ajudar a definir os sítios de reconhecimento envolvidos na expressão gênica e nas vias protéicas. As interações de DNA e proteína são essenciais para processos celulares, como modificações de DNA e regulação transcricional, etc. Por outro lado, as interações de proteína e proteína desempenham papéis vitais em processos celulares, como replicação, transcrição, tradução e transdução de sinal. Portanto, é extremamente importante identificar essas interações de moléculas celulares por meio de diferentes ensaios. Levedura um híbrido e levedura dois híbridos são dois ensaios baseados in vitro para analisar interações DNA-proteína e proteína-proteína.
O que é Levedura Um Híbrido?
Yeast one hybrid (Y1H) é um ensaio baseado in vitro para analisar as interações DNA-proteína intracelular. Esse método foi estabelecido pela primeira vez por Wang e Reed em 1993. Desde então, tem demonstrado maior poder na pesquisa biológica. Neste ensaio, existem dois componentes principais: isca de DNA e presas de proteína.
Figura 01: Levedura Um Híbrido
No procedimento, uma sequência de DNA (isca de DNA) é primeiro clonada a montante de dois repórteres diferentes (HIS3, LacZ). Essas construções repórter são integradas ao genoma de uma cepa de levedura. Fatores transcricionais são tomados como presas de proteína. Os fatores transcricionais são fundidos ao domínio de ativação transcricional (AD) do fator transcricional Gal4 de levedura para produzir proteínas híbridas. Toda esta proteína híbrida é integrada num plasmídeo antes de ser introduzida na estirpe de levedura. Após a introdução do plasmídeo recombinante, quando o fator transcricional interage com o fragmento de DNA, a porção AD ativa a expressão do gene repórter (HIS3 ou LacZ). O sequenciamento dos plasmídeos permite a identificação do fator de transcrição que pode se ligar ao fragmento de DNA. Recentemente, um método híbrido de levedura foi usado para pesquisar o diagnóstico de doenças. Portanto, no futuro, este ensaio será mais amplamente utilizado em pesquisas científicas e tratamentos médicos.
O que é Levedura Dois Híbrido?
Yeast two hybrid (Y2H) é um ensaio baseado in vitro para analisar proteínas intracelulares e interações de proteínas. Este método foi originalmente encontrado por Stanley Fields e Ok-Kyu Song em 1989. Esta técnica detecta interações proteína-proteína usando o fator de transcrição Gal4 da levedura.
Figura 02: Levedura Dois Híbrido
Neste método, duas fusões (híbridas) são construídas primeiro usando proteínas de interesse: fundindo uma proteína com o domínio de ligação ao DNA (DBD) e fundindo a outra proteína com o domínio ativador (AD) do fator de transcrição Gal4. A proteína fundida com DBD é conhecida como isca, enquanto a proteína fundida com AD é conhecida como presa. Na cepa de levedura, após a interação da isca e presa, DBD e AD são aproximados para gerar um fator de transcrição funcional Gal4 a montante do gene repórter. O fator de transcrição funcional ativa a expressão do gene repórter. Além disso, este método é atualmente usado para rastrear as interações de proteínas integrais de membrana em células de mamíferos.
Quais são as semelhanças entre o Yeast One Hybrid e o Yeast Two Hybrid?
- Levedura um híbrido e levedura dois híbridos são dois ensaios baseados in vitro para analisar interações DNA-proteína e proteína-proteína.
- Estes ensaios usam cepas de levedura.
- Ambos os ensaios usam o domínio de ativação (AD) do fator de transcrição Gal4.
- Eles usam a expressão do gene repórter (HIS3, ou LacZ) para detectar interações.
- Eles têm isca e presa.
- Ambos os ensaios são muito úteis na pesquisa biológica moderna.
Qual é a diferença entre o Yeast One Hybrid e o Yeast Two Hybrid?
Levedura um híbrido é um ensaio baseado in vitro para analisar interações de DNA e proteína, enquanto levedura dois híbrido é um ensaio baseado in vitro para analisar proteínas e interações de proteína. Assim, esta é a principal diferença entre levedura um híbrido e levedura dois híbridos. Além disso, na levedura um híbrido, a isca é um fragmento de DNA e a presa é uma molécula de proteína. Por outro lado, na levedura dois híbridos, tanto a isca quanto a presa são moléculas de proteína.
O infográfico abaixo lista as diferenças entre levedura um híbrido e levedura dois híbridos em forma de tabela para comparação lado a lado.
Resumo – Levedura Um Híbrido vs Levedura Dois Híbrido
Levedura um híbrido e levedura dois híbridos são dois importantes ensaios in vitro. Levedura um híbrido é um ensaio baseado in vitro para analisar interações de DNA e proteína, enquanto levedura dois híbrido é um ensaio baseado in vitro para analisar proteínas e interações de proteína. Assim, esta é a principal diferença entre levedura um híbrido e levedura dois híbridos.
