A principal diferença entre HPLC de fase reversa e fase normal é que a HPLC de fase reversa usa uma fase estacionária não polar e uma fase móvel polar, enquanto a HPLC de fase normal usa uma fase estacionária polar e uma fase móvel menos polar.
A HPLC de fase normal é a técnica mais antiga de HPLC que Tswett usou em suas separações de extratos vegetais; ele usou giz em uma coluna de vidro. Este foi o modo clássico de cromatografia que levou a nomeá-lo como a técnica “normal”. HPLC de fase reversa, por outro lado, é o oposto da técnica normal, que os cientistas desenvolveram recentemente.
O que é HPLC de fase reversa?
HPLC de fase reversa é uma técnica cromatográfica na qual usamos uma fase estacionária hidrofóbica. Entre todos os métodos de HPLC, usamos esse método em aproximadamente 70% devido à sua ampla aplicabilidade e reprodutibilidade. A fase estacionária é apolar e a fase móvel é polar.
Na maioria das vezes, os cientistas usam uma mistura aquosa de água com um solvente orgânico polar miscível, como acetonitrila ou metanol como fase móvel. Portanto, os analitos interagem com a fase estacionária apolar.
O que é HPLC de fase normal?
A HPLC de fase normal é uma técnica cromatográfica na qual utilizamos uma fase estacionária hidrofílica. É o método tradicional de HPLC, embora não o usemos muito. A fase estacionária é polar e a fase móvel é apolar. Mais importante ainda, a fase móvel desta técnica é 100% orgânica. Isso significa que nenhuma água é usada para isso.
Figura 01: Um perfil de amostra para cromatogramas de HPLC de fase normal e de fase reversa de acordo com a polaridade dos componentes no analito.
Normalmente, a fase estacionária contém sílica, ciano, diol, fases com ligações amino, etc. As fases móveis incluem solventes orgânicos como hexano, acetato de etila, etc. Esta técnica baseia-se na retenção de moléculas de solvente ou analito no fase estacionária polar.
Qual é a diferença entre HPLC de fase reversa e fase normal?
HPLC de fase reversa é uma técnica cromatográfica na qual usamos uma fase estacionária hidrofóbica. A fase estacionária desta técnica é apolar, enquanto a fase móvel é polar. Além disso, os cientistas usam uma mistura aquosa de água com um solvente orgânico polar miscível, como acetonitrila ou metanol, como fase móvel em HPLC de fase reversa. Em contraste, a HPLC de fase normal é uma técnica cromatográfica na qual utilizamos uma fase estacionária hidrofílica. A fase estacionária desta técnica é polar enquanto a fase móvel é apolar. Além disso, os cientistas usam solventes orgânicos, como hexano, acetato de etila, etc., como fase móvel da HPLC de fase normal. O infográfico abaixo apresenta a diferença entre HPLC de fase reversa e fase normal em forma de tabela.
Resumo – Fase Reversa vs HPLC de Fase Normal
As técnicas de HPLC de fase reversa e fase normal são duas técnicas de cromatografia líquida. A principal diferença entre HPLC de fase reversa e fase normal é que a HPLC de fase reversa usa uma fase estacionária não polar e uma fase móvel polar, enquanto a HPLC de fase normal usa uma fase estacionária polar e uma fase móvel menos polar.
