A principal diferença entre sondas radioativas e não radioativas é que as sondas radioativas são sequências de DNA ou RNA de fita simples marcadas com isótopos radioativos, enquanto as sondas não radioativas são sequências de DNA ou RNA de fita simples marcadas com uma etiqueta química ou uma etiqueta fluorescente.
A hibridização de ácidos nucleicos é uma técnica importante em biologia molecular, especialmente no diagnóstico microbiano. Ajuda a identificar ou detectar uma determinada sequência de ácido nucleico. Nesta técnica, os ácidos nucleicos são fixados a uma superfície sólida e hibridizados com uma sonda. Uma sonda é um fragmento de DNA ou RNA que é complementar a uma sequência de interesse. Se a sequência alvo estiver presente na amostra, a sonda hibridizará com ela e a tornará detectável. Existem dois tipos de sondas como sondas radioativas e não radioativas. Portanto, podemos marcar as sondas com uma etiqueta radioativa ou uma etiqueta fluorescente.
O que são Sondas Radioativas?
As sondas radioativas são os fragmentos de DNA ou RNA de fita simples com uma etiqueta radioativa. Os radioisótopos são usados na preparação de sondas radioativas. Os radioisótopos 32P, 33P e 35S são comumente usados na marcação de sondas. Além disso, os radioisótopos 3H e 1251 também são usados em menor grau na marcação de sondas. Mas eles são usados para aplicações específicas. Entre os diferentes radioisótopos, 32P é o isótopo mais comumente usado na marcação de sondas radioativas.
As sondas radioativas proporcionam um maior grau de confiabilidade e especificidade. Portanto, eles fornecem sensibilidade máxima e permitem a quantificação precisa das sequências alvo. No entanto, existem várias desvantagens associadas às sondas radioativas. Eles têm meias-vidas curtas. Além disso, eles são perigosos e a produção, uso e descarte são problemáticos durante o manuseio. Além disso, a preparação da sonda radioativa é um processo caro. Portanto, devido às questões de segurança e custo, as sondas radioativas não são usadas como sondas não radioativas hoje em dia.
O que são sondas não radioativas?
As sondas não radioativas são o segundo tipo de sondas marcadas quimicamente. A digoxigenina é uma sonda não radioativa, que é um marcador baseado em anticorpos. As sondas de digoxigenina são específicas e sensíveis. A biotina é outro marcador usado na preparação de sondas não radioativas. Os sistemas de detecção de biotina/estreptavidina e digoxigenina/anticorpo são as sondas não radioativas mais comumente usadas na hibridização. Além disso, o sistema de peroxidase de rábano é outro sistema de sonda não radioativo. Uma vez que essas sondas não radioativas são hibridizadas com as sequências alvo, elas podem ser detectadas por autorradiografia ou outras técnicas de imagem.
Figura 01: Hibridização com Sondas Não Radioativas
As sondas não radioativas são usadas com mais frequência na hibridização de ácidos nucleicos do que as sondas radioativas. Isso ocorre porque as sondas não radioativas não estão associadas a materiais perigosos. Além disso, os métodos de detecção não radioativos requerem tempos de exposição mais curtos para detectar o sinal de hibridização. No entanto, as etapas envolvidas na hibridização do DNA com sondas não radioativas são geralmente tediosas e demoradas. Além disso, as soluções comercialmente disponíveis são caras.
Quais são as semelhanças entre sondas radioativas e não radioativas?
- As sondas radioativas e não radioativas são dois tipos de sondas usadas na hibridização de ácidos nucleicos.
- Facilitam a detecção de sequências alvo na amostra.
- Ambos os tipos de sondas são igualmente sensíveis e específicos.
Qual é a diferença entre sondas radioativas e não radioativas?
As sondas radioativas são as sequências de DNA ou RNA de fita simples marcadas com isótopos radioativos, enquanto as sondas não radioativas são as sequências de DNA ou RNA de fita simples marcadas com uma etiqueta química. Portanto, esta é a principal diferença entre sondas radioativas e não radioativas. Além disso, isótopos radioativos são perigosos. Portanto, as sondas radioativas são consideravelmente perigosas, enquanto as sondas não radioativas não são perigosas.
Além disso, outra diferença entre sondas radioativas e não radioativas são suas desvantagens. As meias-vidas curtas e os perigos associados à sua produção, uso e descarte são as desvantagens do uso de sondas radioativas. Por outro lado, as etapas envolvidas na hibridização do DNA com sondas não radioativas são geralmente tediosas e demoradas.
O infográfico abaixo mostra mais comparações relacionadas à diferença entre sondas radioativas e não radioativas.
Resumo – Sondas Radioativas vs Não Radioativas
Uma sonda é um fragmento de DNA ou RNA que contém uma sequência de nucleotídeos que é complementar à sequência de interesse. Para detectar a sequência alvo, as sondas podem ser marcadas radioativamente, fluorescentemente ou quimicamente. As sondas se ligam a sequências complementares na amostra. As sondas radioativas são marcadas com isótopos radioativos, enquanto as sondas não radioativas são marcadas com biotina, digoxigenina ou peroxidase de rábano. Assim, esta é a principal diferença entre sondas radioativas e não radioativas.
