Key Difference – Primer para frente x reverso
Reação em cadeia da polimerase (PCR) é um método de amplificação de DNA que é usado em aplicações de biologia molecular. É uma técnica comumente usada que faz milhões a bilhões de cópias de uma sequência de DNA particularmente interessante. É um método in vitro realizado em laboratórios. A técnica de PCR é totalmente dependente da DNA polimerase produzida comercialmente chamada Taq polimerase. E também requer vários outros componentes e manutenção de temperatura adequada. Um componente importante são os primers. Os primers são as sequências curtas de DNA projetadas especificamente para a sequência de DNA alvo. Eles geralmente têm cerca de 20 nucleotídeos de comprimento. A Taq polimerase catalisa a adição de nucleotídeos na sequência de nucleotídeos preexistente. Assim, os primers servem como pontos de partida para a síntese de novas fitas. A Taq polimerase funciona apenas na direção 5' para 3', portanto, a síntese de DNA ocorre na mesma direção 5' para 3'. Como o DNA é de fita dupla, dois tipos de primers são necessários na PCR. Eles são conhecidos como primer direto e primer reverso. Os primers direto e reverso são denominados com base na direção do alongamento do primer no DNA quando ocorre a síntese de DNA. O primer para frente hibridiza com a fita de DNA antisense e inicia a síntese da fita +ve do gene na direção 5' para 3'. O primer reverso hibrida com a fita sense e inicia a síntese da fita complementar da fita codificante; que é -ve a fita do gene na direção 5' para 3'. Esta é a principal diferença entre primers diretos e reversos.
O que é uma cartilha direta?
Orientação direta é a síntese da fita codificadora ou da fita de sentido de um gene. A Taq polimerase catalisa a síntese de uma nova fita na direção 5' para 3'. A síntese da fita codificante ocorre quando o iniciador hibrida com a fita não codificante ou antisense e se alonga na direção 5' para 3'.
Figura 01: Primers direto e reverso
O primer que hibrida com a fita antisense ou a fita não codificante ou a fita molde é conhecido como primer direto, pois o primer direto atua como ponto de partida para a síntese da fita codificante ou positiva do gene. O primer direto tem uma sequência de nucleotídeos curta que é complementar à extremidade flanqueadora 3' da fita antisense. Ele hibridiza com a fita antisense e facilita a Taq polimerase para adicionar nucleotídeos que são complementares à fita molde.
O que é um primer reverso?
O primer reverso é a sequência curta de DNA que hibrida com a extremidade 3' da fita sense ou da fita codificadora. O primer reverso serve como ponto de partida para sintetizar uma fita complementar da sequência codificante ou da sequência não codificante. O primer reverso é projetado complementar à extremidade 3' da fita de codificação. Assim, ele se emparelha com a extremidade 3' flanqueadora da fita codificadora e permite que a Taq polimerase sintetize a fita antisense ou a fita molde. Como sua orientação é invertida, esse primer é rotulado como primer reverso.
Os primers reversos e diretos são importantes para a produção de milhões a bilhões de cópias de regiões específicas do DNA que são alvo ou interessadas.
Quais são as semelhanças entre a cartilha direta e reversa?
- Os primers direto e reverso são feitos de oligonucleotídeos.
- Ambos os primers diretos e reversos possuem uma sequência de nucleotídeos curta complementar às extremidades flanqueadoras das fitas duplas do DNA.
- Os primers direto e reverso geralmente consistem em 20 nucleotídeos.
- Os primers direto e reverso são usados nas reações em cadeia da polimerase.
- Ambos os Primers Forward e Reverse são sintetizados comercialmente.
- Os primers Forward e Reverse são estáveis à temperatura e normalmente possuem Tm semelhante.
- Os primers direto e reverso são emparelhados com as sequências de DNA alvo.
- Os primers direto e reverso são projetados de acordo com as reações de PCR.
- Os primers direto e reverso são servidos como pontos de partida para a amplificação do DNA.
- Os primers reversos e diretos são importantes para a produção de milhões de cópias de regiões específicas de sequências de DNA direcionadas ou interessadas.
Qual é a diferença entre primer direto e reverso?
Forward Primer vs Reverse Primer |
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| Forward primer é a sequência curta de DNA que hibridiza com a extremidade 3' da fita não codificante ou molde do gene e serve como ponto de partida para sintetizar a sequência codificadora. | Primer reverso é a sequência curta de DNA que hibridiza com a extremidade 3' da fita codificante ou não-modelo e serve como ponto de partida para sintetizar a sequência não codificante. |
| Fio de Recozimento | |
| Forward primer recozimento com fita modelo. | Reverse primer hibrida com a fita não-molde. |
| Nova sequência resultante | |
| Forward primer facilita a síntese da sequência de codificação. | O primer reverso facilita a síntese da sequência não codificante. |
Resumo – Avanço x Reverso Primer
Existem dois tipos de primers envolvidos na técnica de PCR. Eles são primers diretos e reversos. Com base no alongamento do primer na síntese da nova fita de DNA, esses primers são rotulados ou nomeados. A Taq polimerase sintetiza o novo DNA na orientação 5' para 3'. Assim, os primers são projetados como complementares às extremidades 3' das fitas duplas. O primer direto que se alonga na direção de 5' para 3' hibridiza com a extremidade 3' do antisense ou o modelo ou a sequência não codificante. Ele serve como ponto de partida para sintetizar a sequência de codificação. O primer reverso que se alonga na direção de 5' para 3' hibridiza com a extremidade 3' da codificação ou do não molde ou da fita sense. Ele serve como ponto de partida para sintetizar a sequência não codificante. Esta é a diferença entre primer direto e reverso.
