Diferença chave – coloração de Gram vs ácido rápido
As bactérias são micro-organismos muito pequenos. Eles são transparentes e sua detecção é difícil em condições de vida e não manchadas. Assim, vários métodos de coloração são desenvolvidos para facilitar a detecção bacteriana. Existem três tipos principais de técnicas de coloração: coloração simples, coloração diferencial e coloração estrutural. A coloração diferencial é uma técnica que utiliza mais de uma coloração para diferenciar as bactérias. A coloração de Gram e a coloração ácido-resistente são mais popularmente conhecidas como colorações diferenciais. A coloração de Gram é uma técnica de coloração diferencial, que separa as bactérias em dois grupos conhecidos como bactérias Gram-positivas e bactérias Gram-negativas. A coloração ácido-resistente é uma coloração diferencial usada para identificar organismos ácido-resistentes, como Mycobacterium, de organismos não-ácido-resistentes. Esta é a principal diferença entre a coloração de Gram e a coloração ácido-resistente.
O que é coloração de Gram?
A coloração de Gram é uma importante técnica de coloração diferencial usada para identificação bacteriana em microbiologia. Esta técnica foi introduzida pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram em 1884. A coloração de Gram categoriza as bactérias em dois grandes grupos denominados gram positivos e gram negativos, que são muito importantes na classificação e identificação bacteriana. Os microbiologistas realizam a coloração de Gram como um passo inicial na caracterização bacteriana durante seus estudos.
As bactérias são agrupadas com base nas diferenças em sua parede celular. As bactérias gram positivas são compostas por uma camada espessa de peptidoglicano em sua parede celular, enquanto as bactérias gram negativas são compostas por uma camada fina de peptidoglicano em sua parede celular. O resultado da coloração de Gram será baseado na diferença na espessura da camada de peptidoglicano da parede celular.
A coloração de Grams é realizada usando quatro reagentes diferentes, a saber; corante primário, mordente, agente descolorante e contra-corante. Cristal violeta e safranina são usados como corantes primários e de contraste, respectivamente, enquanto gramas de iodo e álcool a 95% são usados como mordente e descolorante, respectivamente. Os passos básicos da coloração de gramas são os seguintes;
- Um esfregaço bacteriano é preparado em uma lâmina de vidro limpa, fixada a quente e resfriada.
- A mancha é inundada com cristal violeta por 1 a 2 minutos.
- Smear é enxaguado com água corrente da torneira para remover o excesso de manchas.
- Gramas de iodo são aplicados no esfregaço por 1 minuto.
- O esfregaço é enxaguado com água corrente da torneira
- O esfregaço é lavado com álcool 95% por 2 a 5 segundos e enxaguado com água corrente da torneira.
- Smear é contra-corado com safranina por 1 minuto
- O esfregaço é enxaguado com água corrente da torneira, seco e observado ao microscópio.
Ao final da coloração de Gram, as bactérias Gram negativas serão observadas na cor rosa enquanto as Gram positivas serão observadas na cor roxa.
Figura 01: Bactérias Gram negativas e Gram positivas
O resultado da coloração de gramas é determinado pela espessura da camada de peptidoglicano na parede celular. Durante a etapa de descoloração, o corante primário e o mordente são facilmente removidos das bactérias gram negativas e tornam-se incolores, pois possuem uma fina camada de peptidoglicano. A coloração primária é retida nas bactérias gram-positivas, uma vez que possuem uma espessa camada de peptidoglicano. A contracoloração não será eficaz para bactérias gram-positivas devido à retenção da coloração primária. Assim, bactérias gramas positivas serão visíveis na coloração primária, ou seja, na cor púrpura. A contracoloração irá corar as bactérias gram negativas, e elas serão visíveis na cor escolhida, que é a cor safranina. Portanto, é fácil categorizar as bactérias em dois grupos pela coloração de Gram e é valioso na diferenciação e identificação bacteriana.
O que é Ácido Resistente?
A resistência aos ácidos é uma propriedade física de certas bactérias, especificamente sua resistência à descoloração por ácidos durante os procedimentos de coloração. Uma vez corados, esses organismos resistem aos procedimentos de descoloração à base de ácido diluído e/ou etanol comuns em muitos protocolos de coloração. Assim, o nome ‘ácido rápido’ é dado a esses organismos. Esta propriedade é evidenciada devido ao alto teor de material ceroso (ácidos micólicos) em suas paredes celulares. Este teste é fundamental para a identificação do Mycobacterium tuberculosis.
Figura 2: Micobactéria ácido-resistente
Esta coloração ácido-resistente foi desenvolvida por Paul Ehrlich em 1882. A técnica de ácido-resistente de Ehrlich foi modificada por Ziehl-Neelsen e agora é usada com mais frequência. O procedimento de coloração ácido-resistente envolve três reagentes diferentes. Carbol fuschin é usado como corante primário. Álcool ácido é usado como agente descolorante. O azul de metileno é usado como contra-corante. O procedimento de coloração é realizado da seguinte forma.
- A coloração primária (carbol fucsina) é aplicada à amostra fixada na lâmina (todas as células serão coradas em vermelho).
- A lâmina é aquecida a vapor por 5 minutos, o que leva as manchas para dentro das células adequadamente.
- Em seguida, a solução descolorante é adicionada (isso remove o corante vermelho de todas as células, exceto as bactérias ácido-resistentes).
- Azul de metileno é adicionado como um contra-corante (colore todas as células bacterianas descoloridas).
- As bactérias ácido-resistentes permanecem vermelhas, enquanto as não-ácido-resistentes coram em azul.
Quais são as semelhanças entre coloração de Gram e ácido rápido?
- Mancha de Gram e ácido rápido são duas técnicas de coloração diferencial.
- Ambas as técnicas categorizam as bactérias em dois grupos.
- Ambas as técnicas usam duas manchas e uma descolorante.
Qual é a diferença entre coloração de Gram e ácido rápido?
Gram Stain vs Acid Fast |
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| A coloração de Gram é uma técnica de coloração diferencial, que separa as bactérias em dois grupos: bactérias Gram-positivas e bactérias Gram-negativas. | A coloração ácido-resistente é uma coloração diferencial usada para identificar organismos ácido-resistentes de organismos não-ácido-resistentes. |
| Mancha Primária | |
| Cristal violeta é o corante primário comumente usado na coloração de Gram. | Carbol fucsina é o corante primário usado em ácido-resistente. |
| Agente Descolorante | |
| álcool a 95% é usado como agente descolorante na coloração de Gram. | Álcool ácido é usado como agente descolorante em ácido-resistente. |
| Counter Stain | |
| A coloração de Gram usa safranina como contracoloração. | A coloração ácido-resistente usa azul de metileno como contracoloração. |
| Observação | |
| Bactérias Gram negativas são observadas na cor escolhida e bactérias Gram positivas são observadas na cor roxa. | As bactérias ácido-resistentes são observadas na cor vermelha e as não-ácido resistentes são observadas na cor azul. |
Resumo – Coloração de Gram vs Ácido Resistente
A visualização de microrganismos em estado vivo é difícil. Portanto, corantes biológicos e procedimentos de coloração são usados extensivamente para estudar suas propriedades. A coloração diferencial é um tipo de técnica de coloração usada para diferenciar bactérias. A coloração de Gram e a coloração ácido-resistente são duas técnicas de coloração diferencial. A coloração de Gram diferencia bactérias gram negativas e bactérias gram positivas com base na espessura de suas paredes celulares. A coloração ácido-resistente diferencia bactérias ácido-resistentes de bactérias não-ácido resistentes com base no teor de ácido micólico na parede celular. Esta é a diferença entre a coloração ácido-resistente e gram.
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