shRNA vs siRNA
Durante o processo de interferência de RNA (RNAi), a expressão de um gene alvo é derrubada com alta especificidade e seletividade. O RNAi é um processo natural e envolve RNA interferente pequeno (siRNA) e RNA hairpin curto (shRNA) e shRNA bifuncional. Atualmente, o RNAi é amplamente utilizado como ferramenta para terapia personalizada do câncer. As aplicações de RNAi são feitas basicamente com o siRNA de fita dupla sintetizado quimicamente e moléculas de shRNA baseadas em vetor. Embora essas duas moléculas tenham resultados funcionais semelhantes, elas diferem em sua estrutura; assim, os mecanismos moleculares de ação, as vias de RNA e os efeitos fora do alvo dessas duas moléculas também diferem.
shRNA
shRNA é uma sequência de pequena molécula de RNA que faz uma curva apertada que pode ser usada para silenciar a expressão de um gene alvo durante o RNAi. A expressão de shRNA é conseguida por um vetor, que pode ser um vírus ou uma bactéria ou por entrega de plasmídeos. Eles são sintetizados no núcleo das células e transportados para o citoplasma para outros processos. Essas moléculas têm vias de maturação semelhantes ao miRNA; assim, a síntese de miRNA forneceu as bases para a compreensão da síntese de shRNA. Qualquer RNA polimerase II ou III pode transcrever shRNA através de promotores de RNA polimerase II ou III. A vantagem do uso de shRNAs é que eles têm uma taxa de degradação e renovação relativamente baixa. A desvantagem é que ele precisa de um vetor de expressão, o que pode causar alguns problemas de segurança.
siRNA
siRNAs são moléculas de RNA de fita dupla compostas por 20-25 pares de bases de comprimento. Estes são usados para supressão de genes silenciando qualquer gene com sequência nucleotídica complementar na via de RNAi. O knockdown do gene por transfecção de siRNA é muitas vezes mal sucedido devido ao efeito transitório; especialmente em células que se dividem rapidamente e a supressão não dura mais. Para superar esse problema, o siRNA é modificado pela introdução de uma estrutura em gancho de cabelo curto. Esta molécula modificada então conhecida como shRNA. shRNA deve ser convertido em siRNA por um Dicer para continuar sua função normal.
Qual é a diferença entre shRNA e siRNA?
• Ao contrário do siRNA, o shRNA tem uma estrutura em gancho extra. shRNA é uma versão modificada de siRNA.
• shRNA requer um vetor de expressão, enquanto o siRNA não.
• shRNA pode ser usado para knockdown de longo prazo, enquanto siRNA pode ser usado apenas para knockdown de genes de curto prazo.
• Ao contrário da supressão gênica do siRNA, a supressão do shRNA é duradoura e, se inserida por meio de um vetor viral apropriado, pode produzir efeitos permanentes de silenciamento do gene.
• O Dicer é necessário para converter o shRNA de volta à molécula de siRNA para executar suas funções normais.
