A principal diferença entre o ensaio colorimétrico e fluorométrico é que o ensaio colorimétrico determina a concentração de compostos coloridos em uma solução, enquanto o ensaio fluorométrico determina o mecanismo cinético de uma solução.
Um ensaio bioquímico é uma técnica que detecta ou quantifica analiticamente a atividade de uma molécula ou substância biológica. É um processo in vitro. O ensaio colorimétrico e o ensaio fluorométrico são dois tipos de ensaios bioquímicos comuns realizados em laboratórios. Várias técnicas, como ELISA e Western blotting, também são ensaios bioquímicos complexos para a quantificação da atividade metabólica e medição do comportamento funcional de biomoléculas, como proteínas, enzimas e outras moléculas pequenas. Esses tipos de ensaios são usados para a identificação de interações proteína-DNA, proteína-RNA e proteína-proteína.
O que é um ensaio colorimétrico?
Um ensaio colorimétrico é uma técnica que determina a concentração de compostos coloridos em uma solução. Em outras palavras, o ensaio colorimétrico é uma reação que leva a uma mudança de cor devido a uma reação enzimática ou química entre reagentes e analitos. Ensaios colorimétricos são praticados em bioquímica para testar enzimas, compostos específicos, hormônios, anticorpos e outros analitos. Eles usam colorímetros ou espectrofotômetros. Os colorímetros são instrumentos que caracterizam amostras coloridas para fornecer uma medida objetiva das características da cor. Um espectrofotômetro é um dispositivo que mede a intensidade da luz em função da cor ou comprimento de onda da luz.
Figura 01: Ensaio Colorimétrico
Como funciona um ensaio colorimétrico?
Em um ensaio colorimétrico, uma placa é preparada com um determinado anticorpo ligado aos poços. Em seguida, a amostra é adicionada. Isso pode permitir que a amostra se ligue ao anticorpo. Em seguida, um anticorpo de detecção e um substrato são adicionados aos poços para reagir com a sonda de detecção. A solução de parada é adicionada no final antes da leitura. Um poço vazio chamado branco é deixado sem a amostra. No ensaio colorimétrico, quanto mais escura a cor, maior a concentração do analito. Normalmente, apenas um comprimento de onda é necessário para fazer a leitura. Mas se houver uma medição de referência, dois ou mais comprimentos de onda são usados.
O que é um ensaio fluorométrico?
O ensaio fluorométrico é uma técnica que determina o mecanismo cinético das reações enzimáticas. Um ensaio fluorométrico ocorre com a formação de um produto fluorescente a partir de um substrato não fluorescente ou vice-versa. Este ensaio também faz uso da transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET) onde, a reação enzimática altera a posição de dois fluoróforos no substrato, alterando assim a intensidade da fluorescência.
Figura 02: Ensaio Fluorométrico
Os ensaios fluorométricos são geralmente muito mais sensíveis do que outros ensaios. As estimativas de enzimas diagnósticas em amostras de tecidos, células ou fluidos de pacientes aumentam devido à sua maior sensibilidade.
Como funciona um ensaio fluorométrico?
Em um ensaio fluorométrico, um substrato é adicionado à amostra na placa e a resposta de fluorescência é obtida usando o leitor de placas. Aqui, cada célula é medida separadamente. Placas opacas são usadas em ensaios fluorométricos. Isso reduz a dispersão da luz. Dois comprimentos de onda são necessários para este tipo de ensaio. Um comprimento de onda é para detectar a excitação e o outro comprimento de onda é para a emissão.
Quais são as semelhanças entre o ensaio colorimétrico e fluorométrico?
- Ensaio colorimétrico e ensaio fluorométrico são dois tipos de ensaios bioquímicos.
- Ambos os ensaios são realizados para diagnóstico médico.
- Estes ensaios envolvem uma reação enzimática.
- Ambos os ensaios envolvem um substrato e analitos.
Qual é a diferença entre ensaio colorimétrico e fluorométrico?
Um ensaio colorimétrico é uma técnica que determina a concentração de compostos coloridos em uma solução, enquanto o ensaio fluorométrico é uma técnica que determina o mecanismo cinético das reações enzimáticas. Portanto, esta é a principal diferença entre o ensaio colorimétrico e fluorométrico. Além disso, os ensaios fluorométricos são mais sensíveis que os colorimétricos; assim, os ensaios fluorométricos têm a capacidade de detectar mais analitos. Assim, esta é outra diferença importante entre o ensaio colorimétrico e fluorométrico. Além disso, os ensaios fluorométricos requerem dois comprimentos de onda, enquanto os ensaios colorimétricos são realizados com um comprimento de onda.
O infográfico abaixo tabula mais diferenças entre o ensaio colorimétrico e fluorométrico.
Resumo – Ensaio Colorimétrico vs Fluorométrico
Um ensaio bioquímico é um processo analítico usado para determinar e quantificar reações metabólicas celulares. O ensaio colorimétrico e o ensaio fluorométrico são dois tipos de ensaios bioquímicos. O ensaio colorimétrico é uma reação que leva a uma mudança de cor devido a uma reação enzimática ou química entre reagentes e analitos, enquanto o ensaio fluorométrico é uma técnica que é usada para determinar o mecanismo cinético das reações enzimáticas. Ambos os ensaios dependem de uma reação enzimática que envolve um substrato e um analito. Os ensaios fluorométricos são mais sensíveis do que os ensaios colorimétricos. Mais importante ainda, os ensaios fluorométricos requerem dois comprimentos de onda, enquanto os ensaios colorimétricos podem ser realizados com apenas um comprimento de onda. Assim, isso resume a diferença entre ensaio colorimétrico e fluorométrico.
