A principal diferença entre o ensaio BCA e Bradford é que o ensaio BCA é demorado e menos preciso, enquanto o ensaio Bradford é rápido e preciso.
BCA e ensaio de Bradford são dois métodos de ensaio de determinação da concentração de proteína. Esses dois ensaios têm diferentes princípios de ensaio e diferenças em suas precisões.
O que é o ensaio BCA?
O ensaio BCA ou ensaio de ácido bicinconínico é um ensaio bioquímico útil para determinar a concentração total de proteína em uma solução. Este método também é chamado de ensaio Smith em homenagem ao seu inventor, Paul K. Smith. Este método analítico mostra semelhanças com o ensaio de proteína Lowry, ensaio de proteína de Bradford ou reagente de biureto. Podemos observar a concentração total de proteína em uma determinada amostra através de uma mudança de cor da solução da amostra, que passa de verde para roxo. Essa mudança de cor ocorre em proporção ao teor de proteína. Depois disso, podemos usar uma técnica colorimétrica para analisar a intensidade da cor e o teor de proteína na amostra.
BCA Método de Estimativa de Proteínas
Ao considerar o mecanismo do ensaio de BCA, a solução típica de BCA contém uma solução altamente alcalina com um pH de aproximadamente 11,25, e os ingredientes nesta solução incluem ácido bicinconínico, carbonato de sódio, bicarbonato de sódio, tartarato de sódio e sulfato de cobre(II) pentahidratado. Este ensaio depende principalmente de duas reações químicas: a redução de cobre(II) a cobre(I) pelas ligações peptídicas na proteína e a quelação de duas moléculas de ácido bicinconínico com íon cobre(I), resultando em um complexo de cor púrpura que pode absorver a luz no comprimento de onda de 562 nm. Na primeira reação, a quantidade de cobre(II) reduzida por ligações peptídicas é proporcional à quantidade de proteína na amostra.
O que é o ensaio de Bradford?
O ensaio de Bradford é um método analítico espectroscópico útil para medir a concentração de proteína em uma solução. Este método foi desenvolvido por Marion M. Bradford em 1976, e é um método comparativamente rápido e preciso.
Reação de Cor da Proteína e Reagente de Bradford
Podemos usar este método para determinar a concentração da quantidade de proteína em uma amostra. A reação química que ocorre na amostra durante este ensaio depende exclusivamente da composição de aminoácidos da proteína na amostra.
Método Bradford de Estimativa de Proteínas
Ao considerar o método deste ensaio, trata-se de um ensaio de proteína colorimétrica que se baseia na mudança de absorbância do corante chamado Coomassie Brilliant Blue G-250. Geralmente, este corante existe em três formas: forma aniônica (azul), forma neutra (verde) e forma catiônica (vermelha). Portanto, em condições ácidas, o corante muda sua cor de vermelho para azul. Isto é devido à ligação da proteína com o corante. Por outro lado, se não houver proteína para se ligar ao corante, a mudança de cor não aparece, a solução fica com uma cor marrom-avermelhada. Este corante é capaz de formar um complexo forte e não covalente com o grupo carboxila da proteína por meio de forças de Van der Waal e atrações eletrostáticas.
Qual é a diferença entre BCA e Bradford Assay?
BCA e ensaio de Bradford são dois métodos de ensaio de determinação da concentração de proteína. Esses dois ensaios têm diferentes princípios de ensaio e diferenças em suas acurácias. A principal diferença entre o ensaio BCA e Bradford é que o ensaio BCA é demorado e menos preciso, enquanto o ensaio Bradford é rápido e preciso.
O infográfico a seguir resume as diferenças entre o BCA e o ensaio de Bradford em forma de tabela.
Resumo – BCA vs Bradford Assay
O ensaio BCA ou ensaio de ácido bicinconínico é um ensaio bioquímico útil para determinar a concentração total de proteína em uma solução. O ensaio de Bradford é um método analítico espectroscópico útil para medir a concentração de proteína em uma solução. A principal diferença entre o ensaio BCA e Bradford é que o BCA é demorado e menos preciso, enquanto o ensaio Bradford é rápido e preciso.
