A principal diferença FPLC e HPLC é que FPLC é um tipo de cromatografia líquida que purifica grandes biomoléculas, como proteínas, nucleotídeos e peptídeos, enquanto HPLC é um tipo de cromatografia líquida que separa compostos de baixo peso molecular.
A cromatografia líquida é uma técnica usada para separar uma amostra em seus componentes individuais. Essa separação ocorre devido à interação de amostras específicas com fases móveis e estacionárias. Os componentes dentro de uma amostra são separados com base na afinidade de cada componente para a fase móvel na cromatografia líquida. À medida que a fase móvel e a amostra passam por uma coluna, os componentes da amostra começam a se separar em bandas que podem ser detectadas por espectroscopia UV-VIS. Portanto, FPLC e HPLC são dois tipos de técnicas de cromatografia líquida.
O que é FPLC?
FPLC é um tipo de cromatografia líquida que purifica grandes biomoléculas, como proteínas, nucleotídeos e peptídeos. A cromatografia líquida de proteína rápida (FPLC) foi desenvolvida e comercializada pela primeira vez na Suécia pela empresa Pharmacia em 1982. É frequentemente usada para analisar ou purificar misturas de proteínas. Isso ocorre com base no princípio das afinidades dos componentes da amostra para um fluido em movimento (fase móvel) e um material sólido poroso (fase estacionária). Em FPLC, a fase móvel é um tampão e a fase estacionária é uma resina composta por esferas. Geralmente consiste em agarose reticulada embalada em uma coluna cilíndrica de vidro ou plástico.
Figura 01: Aparelho FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography)
Na maior parte da estratégia FLPC, a resina de troca iônica é usada. Portanto, a proteína de interesse se ligará à resina por uma interação de carga. A técnica FLPC também usa dois buffers: buffer 1 (o buffer de execução) e buffer 2 (o buffer de eluição). Inicialmente, quando o tampão e a mistura de amostra passam pela coluna, a proteína de interesse na mistura se ligará à resina por uma interação de carga. Mas a proteína de interesse se dissocia e retorna à solução em tampão de eluição quando o tampão de eluição percorre a coluna no final do processo. Posteriormente, a solução (eluente que contém a proteína de interesse) passa por dois detectores, que medem a concentração de sal e a concentração de proteína. À medida que cada proteína é eluída, ela aparece como um “pico” durante a detecção e pode ser coletada para uso posterior.
O que é HPLC?
HPLC é um tipo de cromatografia líquida que separa compostos de baixo peso molecular. Em 1969, o primeiro HPLC foi fabricado comercialmente pela Waters Corporation, EUA. Na cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), uma mistura de amostra (analito) em um solvente (fase móvel) é bombeada através de uma coluna com material de empacotamento cromatográfico (fase estacionária) em alta pressão. A mistura da amostra é transportada por uma corrente de gás de arraste em movimento de hélio ou nitrogênio.
Figura 02: HPLC (Cromatografia Líquida de Alto Desempenho)
Os componentes na mistura da amostra que têm a menor quantidade de interação com a fase estacionária ou a maior quantidade de interação com a fase móvel sairão da coluna mais rapidamente. Por outro lado, os componentes da mistura da amostra que têm maior interação com a fase estacionária ou menor interação com a fase móvel sairão da coluna mais lentamente. Com base no princípio de interação acima, os componentes da mistura de amostra podem ser separados. Além disso, o detector do instrumento identifica cada componente da mistura da amostra que sai da coluna. A HPLC é usada para inspecionar amostras ambientais e biológicas quanto à presença ou ausência de compostos conhecidos, como drogas, toxinas ou pesticidas. É usado em diferentes indústrias, como farmacêutica, ambiental, forense e química.
Quais são as semelhanças entre FPLC e HPLC?
- FPLC e HPLC são tipos de cromatografia líquida.
- Ambos são usados para separar e identificar amostras biológicas.
- Têm uma fase móvel líquida e uma fase estacionária sólida.
- Ambas as técnicas usam uma coluna para passar pela amostra.
- Essas técnicas usam bombas, detectores, válvulas e software para separação e detecção de amostras.
Qual é a diferença entre FPLC e HPLC?
FPLC é um tipo de cromatografia líquida que é usada para purificar grandes biomoléculas, como proteínas, nucleotídeos e peptídeos. HPLC é um tipo de cromatografia líquida que é usada para separar compostos de baixo peso molecular. Portanto, esta é a principal diferença entre FPLC e HPLC. Além disso, a FPLC utiliza monitores de pH e condutividade, bem como coletores de frações. Em contraste, HPLC não usa monitores de pH e condutividade e coletores de frações.
O infográfico abaixo lista mais diferenças entre FPLC e HPLC em forma de tabela.
Resumo – FPLC vs HPLC
Cromatografia é uma técnica analítica de laboratório utilizada para a separação de componentes de uma mistura. É dividido em vários tipos, como cromatografia em coluna, cromatografia gasosa, cromatografia líquida, cromatografia de troca iônica, etc. FPLC e HPLC são dois tipos de técnicas de cromatografia líquida. FPLC é um tipo de cromatografia líquida que é usada para purificar grandes biomoléculas, como proteínas, nucleotídeos e peptídeos. Por outro lado, HPLC é um tipo de cromatografia líquida que é usada para separar compostos de baixo peso molecular. Assim, este é o resumo do que é a diferença entre FPLC e HPLC.
