A principal diferença entre RP HPLC e HIC é que RP HPLC usa uma fase móvel mais polar e uma fase estacionária menos polar. Considerando que, HIC usa uma fase estacionária hidrofóbica que permite que as moléculas hidrofóbicas se liguem a ela.
Cromatografia é uma técnica analítica que ajuda a separar uma mistura em seus componentes. Primeiro, temos que dissolver a amostra a ser separada em uma solução. Essa mistura solução-substância é chamada de fase móvel. Em seguida, a fase móvel passa por outro material chamado de fase estacionária. A fase estacionária determina a separação dos componentes. A separação ocorre devido à partição do material entre a fase móvel e a fase estacionária.
O que é RP HPLC?
O termo RP HPLC significa Cromatografia Líquida de Alto Desempenho de Fase Reversa. Envolve a separação de componentes em uma mistura, de acordo com a hidrofobicidade. Os componentes hidrofóbicos na fase móvel se ligam aos ligantes hidrofóbicos imobilizados na fase estacionária, enquanto os componentes hidrofílicos eluem através da fase estacionária sem se prenderem à superfície da fase estacionária.
Figura 01: Aparelho HPLC
Além disso, este método tem mais reprodutibilidade em comparação com outras técnicas cromatográficas, e também apresenta ampla aplicabilidade. Portanto, usamos esse método em laboratórios para mais de 75% de todos os métodos de HPLC. Na maioria das vezes, usamos uma mistura aquosa de água com um solvente orgânico polar miscível como fase móvel. Assim, garantirá a fixação dos componentes hidrofóbicos da solução à superfície da fase estacionária.
O que é HIC?
O termo HIC significa Cromatografia de Interação Hidrofóbica. É um tipo de HPLC de fase reversa, e esse método é usado principalmente para a separação de grandes biomoléculas, como proteínas. Neste método, precisamos usar um meio aquoso para fazer a amostra da biomolécula. É porque os solventes orgânicos podem causar a desnaturação das proteínas. Além disso, esta técnica utiliza a interação entre moléculas grandes com uma superfície levemente hidrofóbica da fase estacionária. Além disso, temos que usar uma alta concentração de sal na amostra porque isso favorece a retenção da proteína na embalagem; esse processo é chamado de salga. Ao diminuir a concentração de sal gradualmente, podemos fazer as biomoléculas eluirem separadamente de acordo com sua hidrofobicidade.
Geralmente, este método usa as condições opostas às da cromatografia de troca iônica. Nesta técnica, primeiro, precisamos passar uma solução tampão pela coluna para reduzir a solvatação do soluto na amostra. Isso faz com que as regiões hidrofóbicas da proteína sejam expostas. No entanto, quando a molécula é mais hidrofóbica, menos sal é necessário para promover a ligação. Aqui, os solutos menos hidrofóbicos são eluídos primeiro e, de acordo com a mudança na concentração de sal, os solutos mais hidrofóbicos são eluídos por último.
Qual é a diferença entre RP HPLC e HIC?
Cromatografia é uma técnica analítica para a separação de componentes em uma mistura. RP HPLC e HIC são duas técnicas cromatográficas especializadas. A principal diferença entre RP HPLC e HIC é que RP HPLC usa uma fase móvel mais polar e menos fase estacionária polar, enquanto a HIC usa uma fase estacionária hidrofóbica, que permite que as moléculas hidrofóbicas se liguem a ela.
O infográfico abaixo resume a diferença entre RP HPLC e HIC.
Resumo – RP HPLC vs. HIC
Cromatografia é uma técnica analítica para a separação de componentes em uma mistura. RP HPLC e HIC são duas técnicas cromatográficas especializadas. A principal diferença entre RP HPLC e HIC é que RP HPLC usa uma fase móvel mais polar e uma fase estacionária menos polar, enquanto a HIC usa uma fase estacionária hidrofóbica, que permite que as moléculas hidrofóbicas se conectem a ela.
