Diferença chave – Hibridização in situ vs imunohistoquímica
O diagnóstico de câncer e doenças infecciosas é uma tendência popular em que novas técnicas baseadas em proteômica e genômica são utilizadas com o objetivo de identificar tumores ou células infecciosas, sua proliferação e os locais de desenvolvimento celular e analisar a base genética da maioria das células transmissíveis e Doenças não comunicáveis. Isso resultará no processamento e design de medicamentos precisos e no desenvolvimento de terapias personalizadas para doenças. Hibridização in situ (ISH) e imuno-histoquímica (IHC) são duas dessas técnicas amplamente utilizadas na biologia do câncer e a principal diferença entre hibridização in situ e imunoquímica está nas moléculas que são usadas no procedimento de análise. Em ISH, as sondas de ácido nucleico são usadas na análise enquanto, em IHC, anticorpos monoclonais e policlonais são usados para as determinações diagnósticas.
O que é Hibridização In Situ (ISH)?
A hibridização in situ é uma técnica de hibridização de ácidos nucleicos que é realizada diretamente em uma porção ou seção de tecido, em todo o tecido ou em células. A técnica depende da teoria do emparelhamento de bases complementares de Watson Crick, resultando em híbridos DNA-DNA ou híbridos DNA-RNA que podem detectar genes mutantes ou identificar o gene necessário de interesse. Sequências de DNA de fita simples, sequências de DNA de fita dupla, sequências de RNA de fita simples ou sequências de oligonucleotídeos sintéticos são usadas como sondas durante a técnica de hibridização, e essas sondas são marcadas com um fósforo radioativo em sua extremidade 5' para procedimentos de identificação por autorradiografia ou marcadas usando corantes fluorescentes. Existem diferentes tipos de técnicas de ISH disponíveis com base no tipo de sonda utilizada e no tipo de técnica de visualização seguida.
Figura 01: Hibridização Fluorescente In Situ
Existem muitas aplicações de ISH, principalmente no diagnóstico molecular de doenças infecciosas, a fim de identificar a presença de patógenos e confirmar o patógeno por meio de diagnóstico molecular. Também é usado nas áreas de biologia do desenvolvimento, cariotipagem e análise filogenética e mapeamento físico de cromossomos.
O que é imunohistoquímica (IHC)?
Na técnica de IHC, a principal molécula analisada é o antígeno. Durante a IHQ, anticorpos monoclonais e policlonais são utilizados para determinar a presença de antígenos na infecção ou no estado de proliferação de células malignas. A técnica é baseada na ligação antígeno-anticorpo, e marcadores enzimáticos são usados para esta técnica; uma dessas aplicações é o ELISA (ensaio imunossorvente ligado a enzima). Os marcadores também podem ser anticorpos marcados com fluorescência ou anticorpos marcados por rádio.
Figura 02: Imuno-histoquímica
IHC é amplamente utilizado para detecção de células cancerosas. Os procedimentos diagnósticos visam os antígenos presentes nas células tumorais para identificar e caracterizar o tumor. O mesmo procedimento é incorporado para diagnosticar agentes infecciosos. Os anticorpos monoclonais e policlonais também são usados para analisar diferentes produtos gênicos, permitindo a reação de ligação anticorpo-antígeno entre a proteína desejada e o anticorpo sintético administrado.
Quais são as semelhanças entre hibridização in situ e imunohistoquímica?
- ISH e IHC são reações altamente específicas.
- Ambas as técnicas são altamente precisas.
- Ambas as técnicas podem ser usadas no diagnóstico de câncer e doenças infecciosas.
- Estas técnicas são realizadas em ambientes in vitro estéreis.
- Ambas são técnicas rápidas que fornecem resultados reproduzíveis.
- ISH e IHC usam métodos de detecção como marcação de rádio e técnicas de fluorescência.
Qual é a diferença entre hibridização in situ e imunohistoquímica?
Hibridização In Situ vs Imuno-histoquímica |
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| ISH é uma técnica de hibridização de ácido nucleico que é realizada diretamente em uma porção ou seção de tecido ou em todo o tecido. | IHC é uma técnica em que anticorpos monoclonais e policlonais são utilizados para determinar a presença de antígenos, que são marcadores de proteínas especiais colocados nas superfícies das células. |
| Tipo de Bio Moléculas Analisadas | |
| ISH analisa ácidos nucleicos. | IHC analisa proteínas-antígenos. |
| Base da Reação Bioquímica | |
| O pareamento de bases complementares entre DNA-DNA ou DNA-RNA ocorre nesta técnica. | As interações antígeno-anticorpo estão envolvidas na imuno-histoquímica. |
| Métodos de detecção ligada a enzimas | |
| Métodos de detecção ligados a enzimas não podem ser usados em ISH. | Métodos de detecção ligada a enzimas podem ser usados em IHC. |
Resumo – Hibridização In Situ vs Imuno-histoquímica
Os diagnósticos moleculares são métodos rápidos e confirmatórios que podem ser utilizados para identificar uma doença não transmissível, como câncer ou doença transmissível, como HIV ou tuberculose, com base nos marcadores moleculares presentes nas células que levam à manifestação da doença. Os marcadores moleculares podem estar presentes na forma de proteínas expressas ou no nível genético, com base no qual diferentes técnicas novas são introduzidas para aumentar a eficiência e são menos laboriosas, embora haja um alto custo envolvido com essas técnicas. Assim, a ISH depende da formação do híbrido DNA-DNA ou DNA-RNA, e a IHQ depende das reações específicas entre anticorpo e antígeno. Esta é a diferença entre hibridização in situ.
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