Diferença chave – Imunofluorescência vs Imuno-histoquímica
Diagnóstico de doenças, que utiliza métodos de biologia molecular, tornou-se uma área emergente da tecnologia de laboratório clínico. Inclui todos os testes e métodos para identificar uma doença e compreender a causa de uma doença através da análise de DNA, RNA ou proteínas expressas em um organismo. Os rápidos avanços no diagnóstico molecular permitiram a pesquisa básica sobre doenças transmissíveis e não transmissíveis. Estes são usados para determinar mudanças na sequência ou níveis de expressão em genes ou proteínas cruciais envolvidos na doença. A imunofluorescência (IF) e a imunohistoquímica (IHC) são duas dessas técnicas amplamente utilizadas na biologia do câncer. IF é um tipo de IHC em que um método de detecção de fluorescência é usado para analisar anticorpos monoclonais e policlonais, enquanto IHC usa métodos baseados em produtos químicos para detectar anticorpos monoclonais e policlonais. Esta é a principal diferença entre IF e IHC.
O que é Imunofluorescência (IF)?
Imunofluorescência é uma técnica de detecção em que os anticorpos usados no ensaio são marcados usando corantes fluorescentes ou proteínas fluorescentes para fins de detecção. Anticorpos secundários marcados podem resultar em sinais de fundo indesejados; portanto, a técnica IF é baseada na marcação do próprio anticorpo primário no momento para evitar sinais indesejados durante a detecção. Através desta técnica, a ligação não específica entre o anticorpo primário e secundário é evitada, e é mais rápida, pois não há etapa de incubação secundária envolvida. A qualidade dos dados também foi melhorada.
Figura 01: Coloração de imunofluorescência dupla para BrdU, NeuN e GFAP
Fluorocromos ou corantes fluorescentes são compostos que podem absorver radiação, preferencialmente radiação ultravioleta que é excitada. Quando as partículas atingem o estado fundamental a partir do estado excitado, elas emitem radiação que é capturada e detectada por um detector para formar um espectro. É de grande importância que o marcador fluorescente seja compatível e estável para a reação em particular e deve ser adequadamente conjugado ao anticorpo para obter resultados precisos. Um dos fluorocromos mais utilizados é o isotiocianato de fluoresceína (FITC), que é de cor verde, com comprimentos de onda de pico de absorção e emissão de 490 nm e 520 nm, respectivamente. A rodamina, outro agente usado na FI, é de cor vermelha e possui comprimentos de onda distintos de pico de absorção e emissão de 553 nm e 627 nm.
O que é imunohistoquímica (IHC)?
IHC é um método de teste molecular praticado para identificar e confirmar a presença do antígeno na célula alvo. A célula alvo pode ser uma partícula infecciosa, um patógeno microbiano ou uma célula tumoral maligna. A IHC utiliza anticorpos monoclonais e policlonais para determinar a presença de antígenos presentes na superfície celular das células alvo. A técnica é baseada na ligação antígeno-anticorpo. Um marcador de detecção é conjugado a esses anticorpos para detectar a presença ou ausência do antígeno específico. Esses marcadores podem ser marcadores químicos, como enzimas, anticorpos marcados por fluorescência ou anticorpos marcados por rádio.
Figura 02: Corte de cérebro de camundongo corado por Imuno-histoquímica
A aplicação mais popular da IHC é na biologia de células cancerígenas para identificar a presença de tumores malignos, mas também é usada para a detecção de doenças infecciosas.
Quais são as semelhanças entre imunofluorescência e imunohistoquímica?
- Imunofluorescência e imunohistoquímica ocorrem em condições in vitro.
- Ambas as técnicas são baseadas no antígeno-anticorpo
- Ambas são técnicas muito rápidas.
- Os resultados das técnicas são reproduzíveis.
- Ambos melhoraram a qualidade dos dados.
- Essas técnicas usadas no diagnóstico de câncer e doenças infecciosas.
Qual é a diferença entre imunofluorescência e imunohistoquímica?
Imunofluorescência vs Imuno-histoquímica |
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| IF é uma técnica de detecção em que os anticorpos usados no ensaio são marcados usando corantes fluorescentes ou proteínas fluorescentes para detecção. | IHC é uma técnica de detecção em que os anticorpos usados no ensaio são rotulados usando produtos químicos ou elementos radioativos para detecção. |
| Precisão | |
| A precisão é maior na técnica IF em comparação com a IHC. | A precisão é menor em IHC. |
| Especificidade | |
| IF é mais específico. | IHC é menos específico. |
Resumo – Imunofluorescência vs Imuno-histoquímica
Os mecanismos moleculares trouxeram muitas mudanças no campo da medicina, dando origem a métodos avançados de testes moleculares que trouxeram revoluções no campo do diagnóstico. Essas invenções levaram a uma identificação e confirmação rápida e precisa da doença, permitindo assim a administração e produção bem-sucedidas de medicamentos. Essas técnicas também são usadas em farmacologia para encontrar os alvos dos fármacos e confirmar as propriedades farmacocinéticas do fármaco durante o metabolismo do fármaco. IF e IHQ são dois métodos de diagnóstico que se baseiam no conceito de ligação de antígeno e anticorpo, embora o modo de detecção em ambas as técnicas seja diferente. O IF usa o princípio da fluorescência para detectar o antígeno e o IHC usa o conceito de conjugação química para detectar o antígeno. Esta é a diferença entre IF e IHC.
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