A principal diferença entre imunofluorescência direta e indireta é que a imunofluorescência direta usa um único anticorpo que atua contra o alvo de interesse, enquanto a imunofluorescência indireta usa dois anticorpos para rotular o alvo de interesse.
Imunofluorescência ou imagem celular é uma técnica que é usada para rotular um antígeno alvo específico com um fluoróforo. Aqui, o fluoróforo é um composto químico fluorescente que pode reemitir luz após a excitação da luz. Quando um fluoróforo se liga ao antígeno alvo, ele permite a detecção da molécula alvo na amostra. Para descrevê-lo ainda, quando um antígeno se liga a um anticorpo específico, ele pode ser conjugado com fluoróforos. Assim, é fácil detectar a presença do antígeno alvo na amostra ao observar ao microscópio de fluorescência.
Além disso, existem dois tipos de imunofluorescência; imunofluorescência direta e indireta. A diferença entre a imunofluorescência direta e indireta reside principalmente no número de anticorpos utilizados e na conjugação do fluoróforo. Ou seja, na imunofluorescência direta, o fluoróforo conjuga-se diretamente com o anticorpo primário, enquanto na imunofluorescência indireta, o fluoróforo conjuga-se com o anticorpo secundário.
O que é Imunofluorescência Direta?
A imunofluorescência usa anticorpos para detectar antígenos alvo específicos. A imunofluorescência direta é um dos dois tipos de imunofluorescência. Na imunofluorescência direta, um único anticorpo (anticorpo primário) envolve e o fluoróforo se conjuga diretamente com o anticorpo primário. Ao ligar o anticorpo ao antígeno alvo, o fluoróforo emite fluorescência que pode ser detectada por um microscópio de fluorescência.
Figura 01: Imunofluorescência Direta
No entanto, a imunofluorescência direta é um método caro, pois os anticorpos conjugados primários são caros em comparação com os anticorpos secundários. No entanto, não envolve uma etapa adicional, portanto, uma técnica mais curta. Além disso, as ligações não específicas são reduzidas na imunofluorescência direta. Portanto, a reatividade cruzada das espécies é baixa. Mas na detecção, a sensibilidade da imunofluorescência direta é fraca em comparação com a imunofluorescência indireta.
O que é Imunofluorescência Indireta?
A imunofluorescência indireta é o segundo tipo de imunofluorescência que envolve dois tipos de anticorpos como anticorpos primários e secundários na marcação do antígeno alvo. Neste método, o fluoróforo se conjuga com o anticorpo secundário. Portanto, esta técnica envolve uma etapa adicional.
Figura 02: Imunofluorescência
No entanto, a sensibilidade é alta neste método, pois vários fluoróforos podem ser conjugados a anticorpos secundários e isso facilita a detecção. Além disso, a imunofluorescência indireta é menos dispendiosa devido ao fato de que a conjugação de anticorpos secundários é mais barata e mais fácil. Em comparação com a imunofluorescência direta, a reatividade cruzada das espécies é alta no método indireto.
Quais são as semelhanças entre imunofluorescência direta e indireta?
- São dois tipos de técnica de imunofluorescência.
- Anticorpos primários e fluoróforo envolvem ambos os métodos.
- Além disso, a reação antígeno-anticorpo ocorre em ambos os métodos.
- Além disso, tanto a imunofluorescência direta quanto a indireta utilizam um microscópio de fluorescência para a detecção do antígeno.
Qual é a diferença entre imunofluorescência direta e indireta?
A imunofluorescência pode ser direta ou indireta com base na conjugação do fluoróforo com os anticorpos utilizados. Na imunofluorescência direta, o fluoróforo se conjuga com o anticorpo primário, que é o único anticorpo que envolve essa técnica. Ao contrário disso, na imunofluorescência indireta, o fluoróforo se conjuga com o anticorpo secundário, que é um dos dois tipos de anticorpos que envolvem a técnica. Assim, a principal diferença entre a imunofluorescência direta e indireta é o tipo de anticorpo que se conjuga com o fluoróforo.
O infográfico a seguir fornece uma comparação lado a lado da diferença entre imunofluorescência direta e indireta.
Resumo – Imunofluorescência Direta vs Indireta
Imunofluorescência é uma técnica que é usada para detectar a presença de antígenos específicos em uma amostra. Esta técnica utiliza anticorpos específicos. Portanto, neste, os anticorpos se conjugam com fluoróforos para detectá-los usando um microscópio fluorescente. Além disso, existem dois tipos de imunofluorescência, a saber, imunofluorescência direta e indireta. A imunofluorescência direta envolve um único anticorpo e fluoróforo diretamente conjugado a este anticorpo. A imunofluorescência indireta envolve dois anticorpos; primário e secundário e fluoróforo conjugado ao anticorpo secundário. Como vários anticorpos secundários podem se ligar a um anticorpo primário e vários fluoróforos podem se conjugar com anticorpos secundários, a imunofluorescência indireta é um método mais sensível do que o método direto. Além disso, o método indireto é mais barato que o método direto. Assim, esta é a diferença entre imunofluorescência direta e indireta.
