Key Difference – YAC vs M13 Phage Vector
A clonagem de DNA é um processo importante que permite a propagação de importantes fragmentos de DNA de organismos. Requer a união de DNA específico com DNA vetorial para criar DNA recombinante que se transforma no organismo hospedeiro. Um vetor é uma molécula de DNA que se comporta como um veículo para transportar material genético estranho para outra célula ou organismo. Deve ser capaz de se replicar dentro do organismo hospedeiro e produzir múltiplas cópias de DNA recombinante. Existem diferentes tipos de vetores usados na clonagem de DNA. O cromossomo artificial de levedura (YAC) e o vetor de fago M13 são dois tipos entre eles. A principal diferença entre o vetor de fago YAC e M13 é que YAC é um cromossomo artificial que se replica em células de levedura, enquanto o vetor de fago M13 é um DNA circular de fita simples do bacteriófago M13 que se replica em células de E Coli.
O que é um vetor YAC?
YAC é um cromossomo construído artificialmente que tem a capacidade de transportar um grande segmento de DNA estranho e replicar dentro das células de levedura. Possui centrômero, telômero e sequências de replicação autônoma essenciais para a replicação e estabilidade. YAC também deve conter um marcador ou marcadores seletivos e locais de restrição para torná-lo um vetor de clonagem eficaz. Grandes sequências variando de 1000 kb a 2000 kb podem ser inseridas em YAC e transferidas para levedura.
Figura 01: Vetor YAC
O que é M13 Phage Vector?
Bacteriófago M13 é um vírus que infecta e se replica em E Coli. O genoma do bacteriófago M13 é pequeno em tamanho, cerca de 6,7 kb. É um DNA de fita simples, circular e de sentido positivo. Este vírus infecta especificamente a bactéria E Coli através do F pilus. Uma vez que entra no ssDNA na bactéria, ela sintetiza sua fita complementar e se torna dsDNA ou a forma replicativa (RF) de M13. A RF pode se comportar como um plasmídeo dentro do organismo hospedeiro. O dsDNA se replica dentro de E Coli e produz ssDNA com novos fagos. Esses novos fagos são continuamente liberados da E Coli sem matar a célula hospedeira. No entanto, a infecção retarda o crescimento de E Coli. O dsDNA pode ser extraído de células bacterianas e usado como vetores na clonagem de DNA. Eles são conhecidos como vetores de fagos M13. Eles podem ser facilmente manipulados e usados de forma semelhante aos vetores plasmidiais.
A capacidade inerente de infecção desses fagos M13 serve como uma boa qualificação para ser usado como vetor na clonagem de genes. Ao desenvolver M13 em um vetor, vários elementos devem ser incorporados ao seu genoma. São eles, um gene para a proteína repressora lac (lac I), a região proximal do operador do gene lac Z, um promotor lac e um sítio de clonagem múltipla (poliligante). Quando o dsDNA do M13 é usado como vetor, ele pode ser tratado como um vetor de plasmídeo. No entanto, o uso de ssDNA M13 tem vantagens no sequenciamento de DNA e mutagênese sítio-dirigida.
Como o vetor de fago M13 possui vários locais de clonagem na região lacZ, os vetores recombinados podem ser facilmente identificados pela triagem de colônia azul/branca em placas de ágar contendo IPTG e X-Gal. As placas azuis produzidas nas placas não contêm os fagos recombinados. Portanto, fagos com inserções podem ser selecionados para fins de clonagem.
Figura 02: Bacteriófago M13
Qual é a diferença entre YAC e M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector |
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| YAC é um cromossomo geneticamente modificado que tem a capacidade de transportar um grande segmento de DNA estranho e replicar dentro das células de levedura. | M13 phage vector é um vetor viral desenvolvido pelo bacteriófago M13 que é usado para inserir DNA estranho em E Coli. |
| Propósito | |
| YACs foram projetados para clonar grandes fragmentos de DNA genômico em leveduras. | M13 vetores de fagos são usados para inserir DNA estranho em E Coli. |
| Inserir Comprimento | |
| YACs podem conter inserções genômicas de tamanho megabase (1000 kb – 2000 kb). | O tamanho das inserções é de cerca de 1.500 bps. |
| Construção | |
| YAC DNA é difícil de purificar intacto e requer uma alta concentração para gerar o sistema de vetor YAC. | Ocorre via cadeia de elétrons fotossintética cíclica. |
| Estabilidade | |
| YAC é instável. | Os fagos M13 podem ser facilmente extraídos. |
| Tamanho | |
| As enzimas são moléculas maiores. | Os fagos M13 são estáveis que YAC. |
Resumo – YAC vs M13 Phage Vector
YAC é um sistema de vetor construído artificialmente usando uma região específica do cromossomo de levedura para inserir grandes segmentos de material genético em células de levedura. O vetor de fago M13 é um sistema de vetor derivado do bacteriófago M 13 que usa E coli como organismo hospedeiro. Esta é a principal diferença entre YAC e M13 Phage Vector. Ambos são igualmente úteis em tecnologia de DNA recombinante e clonagem de genes.
