Key Difference – Clonagem vs Subclonagem
Clonagem e Subclonagem são procedimentos biológicos moleculares que criam células ou organismos geneticamente idênticos com o DNA ou gene de interesse. A clonagem é uma técnica que envolve a inserção do gene ou DNA interessado em um vetor, replicação dele dentro de uma bactéria hospedeira e produção de células ou organismos que são cópias exatas da composição genética. A subclonagem é uma técnica que envolve a inserção do gene de interesse, que já está inserido em um vetor, em um vetor secundário, replicação do mesmo dentro de uma bactéria hospedeira e produção de cópias geneticamente idênticas de células ou organismos. A principal diferença entre clonagem e subclonagem é que, na clonagem, o gene de interesse, uma vez ligado a um vetor, continua o processo de clonagem enquanto, na subclonagem, o gene de interesse já clonado é separado do vetor pai e inserido novamente no um vetor de destinatário e continue o processo.
O que é clonagem?
Clonagem é o procedimento que produz organismos ou células geneticamente idênticas. Na natureza, a clonagem acontece nos meios de reprodução assexuada. Quando não há recombinação ou alteração genética, as células filhas recebem a mesma composição genética da mãe. Organismos procarióticos e eucarióticos criam clones por fissão binária, brotamento, mitose, etc. Na biologia molecular, a clonagem de genes ou fragmentos específicos de DNA é um método popular para estudar a estrutura e a função dessa seção específica de DNA.
O principal objetivo da clonagem molecular é fazer milhões de cópias de células ou organismos geneticamente idênticos contendo o fragmento de DNA de interesse (principalmente genes). Ele cria organismos com cópias genéticas exatas de outro. Principalmente, genes específicos são clonados em estudos moleculares para obter informações estruturais e funcionais e para sequenciamento de DNA. Além disso, para a produção de proteínas ou produtos específicos em larga escala, a clonagem é amplamente utilizada.
Procedimento de clonagem
Os passos básicos do procedimento de clonagem são os seguintes.
- Identificação e isolamento do gene de interesse. (Amplificação do gene de interesse por PCR).
- Digestão de restrição do gene de interesse (restrição endonuclease corta o gene).
- Digestão de restrição do DNA vetorial. (O DNA vetorial também é cortado usando a mesma endonuclease de restrição).
- Inserção do gene no vetor e formação da molécula recombinante.
- Transformação do vetor recombinante em uma bactéria hospedeira.
- Isolamento e identificação das bactérias transformadas (o vetor plasmidial deve conter um gene selecionável, mais comumente um gene de resistência a antibióticos para rastrear bactérias transformadas).
- Expressão do gene recombinante no hospedeiro.
Figura_01: Procedimento de clonagem
O que é Subclonagem?
Subclonagem é um procedimento de mover um gene de interesse de um vetor para outro vetor para ver a expressão do gene para obter a funcionalidade desejada do gene. Neste método, dois vetores estão envolvidos; ou seja, vetor pai e vetor de destino. As inserções clonadas são movidas novamente para um segundo vetor na subclonagem. O objetivo de transferir o gene do primeiro vetor para o segundo vetor é obter algo que não poderia ser feito pelo primeiro vetor ou separar um gene novamente dentro do fragmento de DNA já clonado e expressá-lo sozinho. Enzimas de restrição são usadas neste procedimento no início.
Procedimento de Subclonagem
Os passos básicos da subclonagem são os seguintes.
- Com auxílio de endonucleases de restrição, separação do DNA de interesse no plasmídeo doador (vetor pai).
- Amplificação do DNA de interesse usando PCR.
- Purificação do produto de PCR (DNA de interesse) por eletroforese em gel.
- Abertura do plasmídeo receptor pelas mesmas endonucleases de restrição usadas para separar o DNA de interesse no plasmídeo pai.
- Ligação do DNA de interesse (gene) no plasmídeo receptor para criar o plasmídeo subclonado.
- Transformação do vetor subclonado em uma bactéria hospedeira competente.
- Triagem de células transformadas.
- Purificação do DNA plasmidial e uso para sequenciamento de DNA ou expressão dos genes para obtenção dos produtos desejados.
A subclonagem é realizada em ocasiões de isolamento de um gene do grupo de genes clonados ou quando o gene de interesse é transferido para um plasmídeo útil para ver a função exata do gene de interesse.
Figura_02: Procedimento de Subclonagem
Qual é a diferença entre Clonagem e Subclonagem?
Clonagem vs Subclonagem |
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| Clonagem é o procedimento que produz organismos ou células geneticamente idênticas. | Subclonagem é um procedimento de mover um gene de interesse de um vetor para outro vetor para ver a expressão do gene para obter a funcionalidade desejada do gene. |
| Processo | |
| Separar o DNA de interesse do organismo e inserido em um vetor uma vez e clonado | DNA já clonado é separado do primeiro vetor e inserido em um segundo vetor e clonado. |
| Inserir Movimento via Vetores | |
| Não move inserções (DNA de interesse) de um vetor para outro. | Mova inserções do vetor pai para o vetor de destino. |
Resumo – Clonagem vs Subclonagem
A clonagem cria células ou organismos geneticamente idênticos com o gene ou DNA inserido de interesse. Ele prossegue através da separação e inserção do DNA de interesse em um vetor e expressão dentro de uma bactéria hospedeira. A subclonagem compartilha etapas semelhantes com a clonagem. No entanto, na subclonagem, o fragmento de DNA já clonado (gene de interesse) é inserido em um vetor e transformado em uma bactéria hospedeira. Essa é a principal diferença entre clonagem e subclonagem.
