Diferença chave - Citometria de fluxo vs FACS
No contexto da teoria celular, as células são a unidade estrutural e funcional básica de todos os organismos vivos. A triagem celular é uma metodologia que é utilizada para separar células diferentes de acordo com as características fisiológicas e morfológicas. Podem ser de características intracelulares ou extracelulares. A interação de DNA, RNA e proteínas são consideradas propriedades interativas intracelulares, enquanto a forma, tamanho e diferentes proteínas de superfície são consideradas propriedades extracelulares. Na ciência moderna, as metodologias de classificação de células levaram a auxiliar as diferentes investigações em estudos biológicos e também no estabelecimento de novos princípios através da pesquisa em medicina. A triagem celular é realizada em várias metodologias que incluem tanto metodologias primitivas com menos equipamentos quanto metodologias tecnológicas avançadas com o uso de máquinas sofisticadas. Citometria de fluxo, classificação de células ativadas por fluorescência (FACS), seleção de células magnéticas e classificação de células únicas são as principais metodologias utilizadas. Citometria de fluxo e FACS são desenvolvidos para diferenciar células de acordo com suas propriedades ópticas. FACS é um tipo especializado de citometria de fluxo. A citometria de fluxo é uma metodologia que é utilizada durante a análise de uma população heterogênea de células de acordo com diferentes moléculas de superfície celular, tamanho e volume que permite a investigação de células únicas. FACS é um processo pelo qual uma mistura de amostras de células é classificada de acordo com suas características de dispersão de luz e fluorescência em dois ou mais recipientes. Esta é a principal diferença entre citometria de fluxo e FACS.
O que é Citometria de Fluxo?
A citometria de fluxo é um método que é usado para examinar e determinar a expressão de moléculas intracelulares e a superfície celular e para definir e caracterizar diferentes tipos de células. Também é usado para determinar o volume e o tamanho da célula e para avaliar a pureza das subpopulações que são isoladas. Isso permite a avaliação multiparâmetros de células únicas aproximadamente ao mesmo tempo. A citometria de fluxo é usada para medir a intensidade da fluorescência que é produzida devido a anticorpos marcados com fluorescência que ajudam a identificar proteínas ou ligantes que se ligam a células associadas.
Figura 01: Citometria de Fluxo
Geralmente, a citometria de fluxo inclui principalmente três subsistemas. São eles a fluídica, a eletrônica e a ótica. Na citometria de fluxo, estão disponíveis cinco componentes principais que são usados na classificação de células. São eles, uma célula de fluxo (um fluxo de líquido que é usado para transportá-los e alinhar as células para o processo de sensoriamento óptico), um sistema de medição (pode ser de diferentes sistemas, incluindo lâmpadas de mercúrio e xenônio, de alta potência refrigeradas a água ou lasers de baixa potência refrigerados a ar ou lasers de diodo), um ADC; Sistema conversor analógico para digital, sistema de amplificação e computador para análise. A aquisição é o processo pelo qual os dados são coletados das amostras usando citômetro de fluxo. Este processo é mediado por um computador que está conectado com o citômetro de fluxo. O software presente no computador analisa as informações fornecidas ao computador pelo citômetro de fluxo. O software também tem a capacidade de ajustar os parâmetros do experimento controlando o citômetro de fluxo.
O que é FACS?
No contexto da citometria de fluxo, a classificação de células ativadas por fluorescência (FACS) é um método que é utilizado na diferenciação e classificação de uma amostra de uma mistura de células biológicas. As células são separadas de dois ou mais recipientes. O método de classificação é baseado nas características físicas da célula, que incluem dispersão de luz e características de fluorescência da célula. Esta é uma importante técnica científica, que pode ser utilizada para obter resultados quantitativos e qualitativos confiáveis de sinais de fluorescência que são emitidos de cada célula. Durante a FACS, inicialmente, a mistura de células pré-obtida; uma suspensão é direcionada para o centro de uma estreita corrente de líquido que flui rapidamente. O fluxo de líquido é projetado para separar as células na suspensão com base no diâmetro de cada célula. Um mecanismo de vibração é aplicado ao fluxo de suspensão que resulta na formação de gotículas individuais.
Figura 02: FACS
O sistema é calibrado para criar uma única gota com uma célula. Imediatamente antes da formação das gotículas, a suspensão do fluxo se move ao longo de um aparelho de medição de fluorescência que detecta a fluorescência característica de cada célula. No ponto de formação das gotículas, é colocado um anel de carga elétrica que induz uma carga no anel antes da medição da intensidade de fluorescência. Uma vez que as gotículas são formadas a partir da corrente de suspensão, uma carga é retida dentro das gotículas que então entra em um sistema de deflexão eletrostática. De acordo com a cobrança, o sistema desvia as gotículas para diferentes recipientes. O método de aplicação da carga varia de acordo com os diferentes sistemas utilizados no FACS. O equipamento utilizado no FACS é conhecido como classificador de células ativadas por fluorescência.
Qual é a semelhança entre citometria de fluxo e FACS?
Citometria de fluxo e FACS são desenvolvidos para diferenciar células de acordo com suas propriedades ópticas
Qual é a diferença entre citometria de fluxo e FACS?
Citometria de fluxo vs FACS |
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| A citometria de fluxo é uma metodologia que é utilizada durante a análise de uma população heterogênea de células de acordo com diferentes moléculas de superfície celular, tamanho e volume que permite a investigação de células únicas. | FACS é um processo pelo qual uma mistura de amostras de células é classificada de acordo com suas características de dispersão de luz e fluorescência em dois ou mais recipientes. |
Resumo – Citometria de Fluxo vs FACS
A célula é a unidade estrutural e funcional básica de todos os organismos vivos. A classificação celular é o processo pelo qual as células são isoladas e diferenciadas em diferentes categorias com base em suas propriedades intracelulares e extracelulares. Citometria de fluxo e FACS são duas metodologias importantes na classificação de células. Ambos os processos são desenvolvidos para diferenciar as células de acordo com suas propriedades ópticas. A citometria de fluxo é uma metodologia que é utilizada durante a análise de uma população heterogênea de células de acordo com diferentes moléculas de superfície celular, tamanho e volume que permite a investigação de células únicas. FACS é um processo pelo qual uma mistura de amostras de células é classificada de acordo com suas características de dispersão de luz e fluorescência em dois ou mais recipientes. Esta é a diferença entre Citometria de Fluxo e FACS.
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