A principal diferença entre a coloração com Coomassie e com a prata é que a coloração com coomassie é uma técnica de coloração de proteínas que usa uma coloração azul brilhante de coomassie, enquanto a coloração sliver é uma técnica de coloração de proteínas que usa uma coloração com prata.
Separação e identificação de proteínas são etapas críticas na análise do proteoma. Eles precisam de caracterização de proteínas de alta resolução após a eletroforese em gel. Existem inúmeras técnicas de coloração que incluem diferentes corantes, como corantes aniônicos (azul brilhante de coomassie), cátions metálicos (imidazol-zinco), corantes de prata e corantes fluorescentes, etc. Às vezes, sondas radioativas também podem ser usadas. A escolha da técnica de coloração depende da simplicidade, disponibilidade de equipamentos de imagem no laboratório, etc.
O que é Coloração Coomassie?
A coloração de Coomassie é uma técnica de coloração de proteínas que usa uma coloração azul brilhante de Coomassie. É geralmente chamada de técnica do azul de coomassie. O azul brilhante Coomassie é o corante proteico aniônico mais popular. Esta coloração normalmente cora quase todas as proteínas com boa linearidade quantitativa em sensibilidade média. A coloração azul brilhante de Coomassie liga-se não especificamente a quase todas as proteínas. Existem duas variantes diferentes de coloração azul brilhante de coomassie: R-250 e G-250. O R-250 oferece tempos de coloração mais curtos, enquanto o G-250 está disponível em formulações mais sensíveis e ecológicas.
Figura 01: Coloração Coomassie
Os corantes Coomassie são muito populares em estudos de espectrometria de massa e estudos de identificação de proteínas. Além disso, o corante coomassie bio-seguro é uma formulação não perigosa de coomassie blue G-250 que está atualmente disponível no mercado. A vantagem desta formulação é que requer apenas água para enxaguar e descolorir. A coloração de coomassie bio-segura oferece sensibilidade equivalente ao azul de coomassie G-250 convencional, mas melhor do que a coloração de coomassie R-250. Além disso, possui um protocolo de coloração mais simples e rápido do que o azul Coomassie G-250 convencional. A desvantagem da coloração com azul coomassie é que ela é menos sensível em comparação com a coloração com prata. A coloração com azul de Coomassie é aproximadamente 50 vezes menos sensível que a coloração com prata. No entanto, devido à sua simplicidade de encadernação, é preferido em muitos estudos.
O que é coloração com prata?
A coloração de prata é uma técnica de coloração de proteínas que usa uma coloração de prata. A coloração com prata é usada para corar géis de agarose e poliacrilamida. A coloração com prata de proteínas em géis de agarose foi desenvolvida pela primeira vez em 1973 por Kerenyi e Gallyas. Mais tarde, foi adaptado para proteínas em géis de poliacrilamida que são usados em SDS-PAGE. Atualmente, a coloração com prata também é usada para coloração de DNA ou RNA. Para corar os géis, os géis são incubados com solução de nitrato de prata neste método. A coloração com prata mancha os locais onde as proteínas estão presentes de marrom a preto.
Figura 02: Coloração de Prata
A intensidade da coloração com prata depende da estrutura primária da proteína. Além disso, a limpeza dos recipientes utilizados e a pureza dos reagentes também podem influenciar na qualidade da coloração com prata. No entanto, a desvantagem da coloração com prata é que ela é incapaz de detectar todas as proteínas, especialmente glicoproteínas e proteínas com grandes grupos modificados ligados às suas cadeias laterais.
Quais são as semelhanças entre Coomassie e Silver Staining?
- Coomassie e coloração com prata são duas técnicas usadas na coloração de proteínas.
- Eles podem manchar proteínas e DNA.
- Ambas as técnicas de coloração têm desvantagens.
- Essas técnicas têm etapas semelhantes, como fixação, coloração e descoloração.
Qual é a diferença entre Coomassie e Silver Staining?
A coloração de Coomassie é uma técnica de coloração de proteínas que usa coloração azul brilhante de coomassie, enquanto a coloração de fita é uma técnica de coloração de proteínas que usa coloração de prata. Assim, esta é a principal diferença entre a coloração Coomassie e a prata. Além disso, a coloração com Coomassie é menos sensível que a coloração com prata.
O infográfico abaixo lista as diferenças entre Coomassie e coloração com prata em forma de tabela para comparação lado a lado.
Resumo – Coomassie vs Silver Staining
Para visualizar as proteínas, uma reação química de ligação de corante ou produção de cor específica da proteína pode ser realizada. Isso é chamado de coloração de proteínas. Coomassie e coloração com prata são duas técnicas usadas na coloração de proteínas. A técnica de coloração Coomassie usa coloração azul brilhante de Coomassie, enquanto a coloração sliver usa coloração prata. Então, esta é a principal diferença entre Coomassie e coloração de prata.
