A principal diferença entre o gradiente de sacarose e a ultracentrifugação com almofada de sacarose é que na ultracentrifugação com gradiente de sacarose, um gradiente de sacarose contínuo é usado, enquanto na ultracentrifugação com almofada de sacarose, um gradiente descontínuo de sacarose é usado.
Gradiente de sacarose e ultracentrifugação com almofada de sacarose são dois tipos semelhantes de técnicas usadas para separar tipos específicos de macromoléculas. Em ambas as técnicas, é utilizado um gradiente de densidade de sacarose. Mas na ultracentrifugação com gradiente de sacarose, um gradiente de densidade contínuo é usado enquanto, na ultracentrifugação com almofada de sacarose, um gradiente de densidade descontínuo é usado.
O que é a Ultracentrifugação com Gradiente de Sacarose?
A ultracentrifugação por gradiente de sacarose é uma técnica que pode ser usada para fracionar macromoléculas como DNA, RNA e proteínas. Existem várias etapas nesta técnica. Eles são preparação de gradiente de sacarose, centrifugação, separação e eluição. A preparação do gradiente é o passo chave nesta técnica. Nesta técnica, a amostra contendo macromoléculas de diferentes tamanhos é colocada em camadas na superfície de uma coluna de gradiente de sacarose. Ao centrifugar, macromoléculas de tamanhos diferentes sedimentam através da coluna de gradiente de sacarose em taxas diferentes. A sedimentação depende de vários fatores, incluindo a força de centrifugação, a forma do tamanho e a densidade das macromoléculas, densidade e viscosidade do gradiente. No final da centrifugação, as macromoléculas são espacialmente separadas por densidade. Macromoléculas maiores (macromoléculas de alta densidade) sedimentam em direção ao fundo. As mais leves (macromoléculas de baixa densidade) permanecem no topo do gradiente. Portanto, as moléculas se separam como bandas diferentes. Em seguida, as bandas devem ser separadas e a purificação da macromolécula específica da sacarose deve ser feita.
Figura 01: Ultracentrifugação em Gradiente de Sacarose
No lado da aplicação, este método é amplamente utilizado para fracionamento de moléculas de DNA. A ultracentrifugação com gradiente de sacarose é comumente usada para caracterizar o tamanho e a composição do complexo proteico. Além disso, esta técnica é utilizada para a purificação parcial de mRNA.
O que é a ultracentrifugação com almofada de sacarose?
A ultracentrifugação em almofada de sacarose é outra técnica que permite o fracionamento de macromoléculas. Ao contrário da ultracentrifugação com gradiente de densidade de sacarose, a ultracentrifugação com almofada de sacarose usa um gradiente de densidade descontínuo. A concentração de sacarose aumenta de cima para baixo em etapas discretas. Nesta técnica, a separação é conseguida colocando o extrato clarificado em cima de um pequeno volume de uma solução de sacarose em um tubo de centrífuga, a chamada almofada de sacarose. Isso permite uma melhor separação na centrifugação de alta velocidade. Quando as moléculas se separam como uma banda entre a almofada de sacarose, a banda branca pode ser coletada e purificada. Além disso, as impurezas podem ser removidas usando o método de almofada de sacarose. O método de almofada de sacarose permite que 60-70% do tubo seja preenchido com a amostra. Assim, o método de almofada de sacarose permite que um maior volume de amostra seja processado.
Quais são as semelhanças entre o gradiente de sacarose e a ultracentrifugação com almofada de sacarose?
- Gradiente de sacarose e ultracentrifugação com almofada de sacarose são duas técnicas usadas para separar uma mistura de macromoléculas.
- Em ambos os métodos, um gradiente de sacarose é usado.
- Centrifugação é um passo em ambos os métodos.
- As moléculas sedimentam como uma banda ou zona em cada método.
Qual é a diferença entre o gradiente de sacarose e a ultracentrifugação de sacarose?
A ultracentrifugação com gradiente de sacarose é uma técnica que usa um gradiente contínuo de sacarose no tubo de centrifugação, enquanto a ultracentrifugação com almofada de sacarose é uma técnica que usa um gradiente descontínuo de sacarose. Assim, esta é a principal diferença entre o gradiente de sacarose e a ultracentrifugação com almofada de sacarose.
Além disso, a ultracentrifugação com almofada de sacarose permite que um volume maior da amostra seja processado, enquanto a ultracentrifugação com gradiente de sacarose permite que um volume comparativamente baixo da amostra seja processado.
Abaixo o infográfico tabula mais diferenças entre gradiente de sacarose e ultracentrifugação com almofada de sacarose.
Resumo – Gradiente de Sacarose vs Ultracentrifugação em Almofada de Sacarose
A ultracentrifugação com gradiente de sacarose separa macromoléculas usando um gradiente contínuo de sacarose. Em contraste, a ultracentrifugação com almofada de sacarose usa um gradiente descontínuo de sacarose para separar tipos específicos de partículas em uma mistura. Portanto, esta é a principal diferença entre o gradiente de sacarose e a ultracentrifugação com almofada de sacarose. O método de almofada de sacarose permite a coleta de partículas morfologicamente intactas, pois não causa estresse mecânico, ao contrário da ultracentrifugação com gradiente de sacarose, que esmaga as moléculas até o fundo do tubo. Além disso, a ultracentrifugação com almofada de sacarose permite que um volume maior da amostra seja processado do que a ultracentrifugação com gradiente de sacarose.
