A principal diferença entre filtração em gel e cromatografia de afinidade é que a cromatografia de filtração em gel depende das diferenças de peso molecular ou tamanho da amostra do analito, enquanto a cromatografia de afinidade depende da afinidade de um analito para um ligante imobilizado.
O termo cromatografia em química analítica refere-se ao processo de separação de componentes em uma mistura usando diferentes técnicas. Cromatografia é um nome coletivo que representa vários métodos diferentes de separação.
O que é Cromatografia de Filtração em Gel?
A cromatografia de filtração em gel é uma técnica analítica na qual a separação dos componentes depende da diferença de peso ou tamanho molecular. Esta técnica também é conhecida como cromatografia de exclusão de tamanho ou cromatografia de peneira molecular. A técnica de separação neste processo depende da capacidade diferente das moléculas na amostra para entrar nos poros do meio de filtração em gel.
Na técnica de filtração em gel, a fase estacionária contém grânulos de material hidratado, semelhante a uma esponja, com poros de dimensões moleculares contendo uma estreita faixa de tamanhos. Se passarmos uma solução aquosa composta por moléculas de vários tamanhos por uma coluna contendo essas “peneiras moleculares”, as moléculas maiores que os poros do meio filtrante se movem rapidamente pela coluna. Em contraste, as moléculas menores entram nos poros do gel e tendem a se mover lentamente pela coluna. As moléculas eluem da coluna em ordem decrescente de tamanho molecular. Aqui, o limite de exclusão do gel é a massa molecular das menores moléculas incapazes de penetrar nos poros de um determinado gel.
Existem diferentes tipos de técnicas de filtração em gel, como o método de filtração em gel indireto, filtração em gel em estado estacionário, diálise em gel, etc. A cromatografia de filtração em gel indireta é útil na determinação de hormônios tireoidianos livres. A cromatografia de filtração em gel em estado estacionário é uma técnica indireta útil principalmente para a medição de esteróides livres como cortisol, testosterona, etc. A diálise com esfera de gel, por outro lado, é uma modificação da filtração em gel em estado estacionário que é comparativamente mais simples.
O que é Cromatografia de Afinidade?
A cromatografia de afinidade é uma técnica analítica e um método de separação que depende de uma interação de ligação específica entre um ligante imobilizado e seu parceiro de ligação. Alguns exemplos incluem ligação anticorpo-antígeno, ligação enzima-substrato e ligação enzima-inibidor. Portanto, esta técnica tem muitas aplicações importantes na purificação de ácidos nucleicos, purificação de proteínas de extratos celulares e purificação de sangue.
Nesta técnica, a propriedade mais importante é a imobilização do ligante. Podemos usar vários materiais como acrilatos e sílica gel para isso. É importante evitar a interferência estérica da molécula alvo no ligante. Além disso, um inibidor é ligado à fase sólida. Chamamos esse inibidor de espaçador. Classicamente, um espaçador consiste em uma cadeia de hidrocarbonetos.
A fase estacionária da cromatografia de afinidade contém o núcleo, o espaçador e o ligante. Às vezes, também possui um íon metálico que é acoplado ao ligante. A fase sólida mais preferida para a fase estacionária nesta técnica é o gel de agarose porque é facilmente dispensado para encher e empacotar a coluna com leitos de resina de qualquer tamanho e é grande o suficiente para que as biomoléculas fluam livremente para dentro e através das esferas. Os ligandos podem ligar-se covalentemente ao polímero do grânulo de várias maneiras. Os compostos espaçadores mais comuns são brometo de cianogênio, epóxido, epóxido com ácido C6 e diamina. Por outro lado, o ligante que podemos usar difere de acordo com o alvo, por exemplo, anticorpo-antígeno, íons de ferro ou alumínio-fosfoproteínas, avidina-biotina, glutationa-GST, proteínas quelante-marcadas com His, etc.
Qual é a diferença entre filtração em gel e cromatografia de afinidade?
A cromatografia é uma importante técnica analítica. A cromatografia de filtração em gel e a cromatografia de afinidade são duas variações importantes da cromatografia. A principal diferença entre filtração em gel e cromatografia de afinidade é que a cromatografia de filtração em gel depende das diferenças de peso molecular ou tamanho da amostra do analito, enquanto a cromatografia de afinidade depende da afinidade de um analito para um ligante imobilizado.
Resumo – Filtração em Gel vs Cromatografia de Afinidade
Existem diferentes tipos de técnicas cromatográficas de acordo com sua aplicação e a natureza da amostra do analito. A filtração em gel e a cromatografia de afinidade são dois desses tipos de técnicas. A principal diferença entre filtração em gel e cromatografia de afinidade é que a cromatografia de filtração em gel depende das diferenças de peso molecular ou tamanho da amostra do analito, enquanto a cromatografia de afinidade depende da afinidade de um analito para um ligante imobilizado.
