A principal diferença entre crRNA tracrRNA e gRNA é que crRNA é um dos dois tipos de RNA de CRISPR, que é complementar à sequência de DNA alvo, enquanto tracrRNA é o segundo tipo de RNA de CRISPR, que serve como um andaime de ligação para a Cas nuclease e gRNA é um dos dois principais componentes do sistema CRISPR-Cas9 de bactérias e archaea que reconhece o DNA alvo e orienta as proteínas Cas para fazer quebras de fita dupla no DNA alvo.
CRISPR significa repetições palindrômicas curtas intercaladas regulares agrupadas. É um dos sistemas imunológicos em bactérias e archaea. Bactérias e arqueas usam esse sistema para se proteger de patógenos virais. É um dos mecanismos mais surpreendentes que envolve uma modificação genética bem sucedida. Este mecanismo (CRISPR-Cas9) é usado como uma nova ferramenta de edição de genes em Biotecnologia. Trouxe novos avanços para a biotecnologia, especialmente no campo da engenharia genética.
Existem dois componentes principais do sistema CRISPR-Cas9. Eles são RNA guia (gRNA) e nucleases associadas a CRISPR (Cas). O RNA guia é uma sequência de RNA específica que guia as proteínas Cas para clivar o DNA alvo. O RNA guia consiste em dois tipos de RNA. Eles são RNA crispr (crRNA) e tracrRNA. As nucleases associadas a CRISPR (Cas) são endonucleases não específicas que fazem quebras de fita dupla no DNA alvo. Ao fazer quebras de fita dupla no DNA alvo, bactérias e archaea direcionam seus mecanismos endógenos de reparo para inativar o DNA viral.
O que é crRNA?
crRNA ou Crispr RNA é um dos dois tipos de RNA guia. Estruturalmente, é uma sequência de 17-20 nucleotídeos. A característica mais valiosa do crRNA é que ele é complementar ao DNA alvo. Portanto, o crRNA combina com a sequência de DNA viral. A especificidade do sistema CRISPR-Cas 9 depende do crRNA. Nas bactérias, o crRNA existe fundido à sequência do tracrRNA, que é o segundo tipo de RNA CRISPR. A produção de crRNA é desencadeada pela reexposição de bactérias a um vírus. Quando exposto, ocorre a transcrição do gene que codifica o crRNA. Então, o mecanismo de defesa começa contra o vírus.
Figura 01: Sistema CRISPR-Cas9
O que é tracrRNA?
CrRNA ativador de trans ou tracrRNA é a segunda parte do RNA guia ou RNA CRISPR. É pronunciado como RNA traçador. O tracrRNA serve como andaime de ligação para a proteína endonuclease Cas 9. Em outras palavras, o tracrRNA funciona como uma alça para guiar Cas9 em direção ao DNA alvo. Estruturalmente, o tracrRNA tem 42 nucleotídeos. Existe combinado com crRNA.
O que é gRNA?
Guide RNA ou gRNA é um dos dois principais componentes do sistema imunológico CRISPR-Cas9. É uma sequência específica de RNA composta por dois elementos: crRNA e tracrRNA. O gRNA reconhece o DNA alvo e direciona as proteínas Cas para fazer quebras de fita dupla no DNA alvo. Para isso, o crRNA consiste em uma sequência complementar de DNA alvo enquanto o tracrRNA guia as proteínas Cas funcionando como uma alça.
Figura 02: gRNA
Projetar o gRNA correto é um passo crítico na ferramenta de edição de genes CRISPR-Cas9. Portanto, o sucesso e a eficiência de edição do sistema CRISPR dependem da sequência correta de gRNA. O gRNA pode ser expresso em células de um plasmídeo transfectado. Quando os plasmídeos clonados são introduzidos nas células, as células hospedeiras geram gRNA. O gRNA mais comumente gerado compreende 100 pares de bases.
Quais são as semelhanças entre crRNA tracrRNA e gRNA?
- crRNA, tracrRNA e gRNA são sequências de RNA encontradas em bactérias e archaea.
- Todos eles pertencem ao sistema CRISPR.
- gRNA é feito de crRNA e tracrRNA.
- Eles estão envolvidos no reconhecimento do DNA do bacteriófago e na orientação das endonucleases em direção ao DNA alvo.
- Portanto, todos os três tipos de RNA estão envolvidos no direcionamento da Cas9 nuclease para fazer quebras de fita dupla em materiais genéticos estranhos invasores.
- O sucesso do experimento CRISPR depende de todos os três tipos de RNA.
Qual é a diferença entre crRNA tracrRNA e gRNA?
crRNA é uma parte do gRNA de CRISPR que é complementar ao DNA alvo, enquanto o tracrRNA é a segunda parte do gRNA, que serve como um andaime de ligação para a Cas nuclease.gRNA é a combinação de crRNA e tracrRNA, e é um dos dois componentes do sistema CRISPR-Cas9, que reconhece o DNA alvo e orienta as nucleases para fazer quebras de fita dupla no DNA alvo. Então, esta é a principal diferença entre crRNA tracrRNA e gRNA.
A tabela a seguir resume a diferença entre crRNA tracrRNA e gRNA.
Resumo – crRNA vs tracrRNA vs gRNA
CRISPR-Cas9 sistema é um sistema imunológico de bactérias e archaea. Este sistema é usado como uma ferramenta de edição de genes em Biotecnologia. O CRISPR consiste em dois tipos de RNA, ou seja, CRISPR RNA (crRNA) e transativando CRISPR RNA (tracrRNA). Eles são coletivamente conhecidos como RNA guia ou gRNA. Este RNA reconhece sequências alvo de patógenos invasores e orienta endonucleases para fazer quebras de fita dupla no DNA alvo. Uma vez que as quebras de fita dupla são feitas no material genético estranho, o mecanismo de reparo endógeno (junção de extremidade não homóloga; NHEJ) inativa o DNA estranho pela introdução de mutações. Assim, isso resume a diferença entre crRNA tracrRNA e gRNA.
