A principal diferença entre o fragmento Klenow e a DNA polimerase 1 é que o fragmento Klenow é uma grande porção da DNA polimerase 1 que não possui atividade de exonuclease de 5' a 3', enquanto a DNA polimerase é uma enzima de E. coli que possui todas as três domínios incluindo atividade de exonuclease de 5' a 3'.
DNA polimerase é uma das principais enzimas envolvidas na replicação do DNA em organismos vivos. Existem diferentes formas de enzima DNA polimerase encontradas em eucariotos e procariontes com base no tamanho e forma. A DNA polimerase 1, 2 e 3 são encontradas apenas em organismos procarióticos e desempenham papéis diferentes na replicação do DNA. A DNA polimerase 1 tem três domínios com 5' a 3' polimerase, 3' a 5' atividade de exonuclease e 5' a 3' atividade de exonuclease. O fragmento Klenow é um produto proteolítico da DNA polimerase 1. Possui atividades de 5 a 3' polimerase e 3' a 5' exonuclease da DNA polimerase 1 intacta, mas não possui a atividade de 5' a 3' exonuclease.
O que é Klenow Fragment?
O fragmento Klenow é uma grande porção da DNA polimerase 1. Ao contrário da DNA polimerase 1, a atividade de exonuclease de 5' a 3' não é observada no fragmento de Klenow, pois não possui o domínio de exonuclease direto de 5' a 3'. Os fragmentos de Klenow são produzidos pela digestão da DNA polimerase 1 com uma protease chamada subtilisina, que é uma enzima que digere proteínas. Em algumas aplicações, a atividade de exonuclease 3' a 5' do fragmento Klenow torna-se indesejável. Ele pode ser removido introduzindo uma mutação no gene que codifica o fragmento Klenow. A enzima resultante que possui apenas a atividade da polimerase 5' a 3' é conhecida como fragmento exo-Klenow. Morfologicamente, o fragmento de Klenow se assemelha à mão direita humana. Possui domínio de exonuclease N-terminal 3'-5' e o domínio de polimerase C-terminal separados por cerca de 30 A.
Figura 01: Fragmento de Klenow e DNA Polimerase 1
O fragmento Klenow é uma ferramenta importante em técnicas de biologia molecular. Os fragmentos Klenow têm vários usos. Eles são extremamente importantes na clonagem de extremidades cegas para produzir fragmentos cegos. Os fragmentos Klenow podem remover saliências de 3′ ou preencher saliências de 5′ para formar extremidades sem corte. Além disso, fragmentos de Klenow são usados para sintetizar DNA de fita dupla a partir de fitas simples. Além disso, eles são usados para preparar sondas marcadas radioativamente usando a atividade de DNA polimerase dependente de DNA de 5' a 3'.
O que é DNA Polimerase 1?
DNA polimerase 1 (Pol 1) é uma enzima encontrada em procariontes que é necessária para a replicação do DNA bacteriano. É o primeiro tipo de DNA polimerase descoberto por Arthur Kornberg em 1956. Pol 1 é a polimerase mais abundante em E. coli. É codificado pelo gene polA e composto por 928 aminoácidos. É composto por três domínios. Todos os três domínios cumprem funções distintas. Dois domínios realizam atividade de exonuclease de 5' a 3' e atividade de exonuclease de 3' a 5'. Devido a esta atividade possuída por Pol 1, é popular como uma enzima de reparo de DNA em vez de uma enzima de replicação de DNA. O terceiro domínio tem a capacidade de catalisar múltiplas polimerizações (5' a 3') antes de liberar o DNA molde e conectar os fragmentos de Okazaki, preenchendo novo DNA e removendo primers de RNA.
Figura 02: DNA Polimerase
Pol 1 isolado de E Coli foi amplamente utilizado em aplicações moleculares. No entanto, uma vez que a Taq Polymerase foi descoberta, ela substituiu a E Coli Pol 1 na tecnologia PCR. A Taq polimerase é uma espécie de DNA polimerase termoestável que pertence a Pol 1.
Quais são as semelhanças entre o fragmento de Klenow e a DNA polimerase 1?
- O fragmento de Klenow é uma grande parte da DNA polimerase 1.
- Eles têm atividade de polimerase de DNA dependente de DNA de 5' a 3' e atividade de exonuclease de 3' a 5' que medeiam a revisão.
- Eles são usados para vários propósitos.
Qual é a diferença entre o fragmento de Klenow e a DNA polimerase 1?
A principal diferença entre o fragmento Klenow e a DNA polimerase 1 é que o fragmento Klenow não possui atividade de exonuclease de 5' a 3', enquanto a DNA polimerase 1 tem atividade de exonuclease de 5' a 3'. Portanto, o fragmento Klenow possui dois domínios, enquanto a DNA polimerase 1 possui todos os três domínios.
O infográfico abaixo mostra mais detalhes da diferença entre o fragmento Klenow e a DNA polimerase 1.
Resumo – Fragmento Klenow vs DNA Polimerase 1
DNA polimerase 1 é uma enzima de E. coli que possui três domínios como domínio de polimerização de 5' a 3', domínio de exonuclease de 3' a 5' e domínio de exonuclease de 5' a 3'. O fragmento de Klenow é uma grande porção da DNA polimerase. F alta-lhe um domínio de DNA polimerase 1, que é o domínio de exonuclease 5' a 3'. A principal diferença entre o fragmento Klenow e a DNA polimerase 1 é que os fragmentos Klenow não possuem domínio de exonuclease de 5' a 3', enquanto a DNA polimerase 1 possui domínio de exonuclease de 5' a 3'.
