Key Difference – Phusion vs Taq Polymerase
DNA polimerases são enzimas amplamente utilizadas em técnicas de biologia molecular e também estão naturalmente presentes em todos os organismos que sofrem replicação de DNA. Eles são as principais enzimas de polimerização que envolvem durante a replicação. A DNA polimerase é capaz de adicionar nucleotídeos à extremidade 3' livre da fita de DNA, causando assim a extensão de uma nova fita. Atualmente, devido aos desenvolvimentos da biologia molecular no diagnóstico de doenças e aplicações industriais, é importante fabricar polimerases com várias propriedades benéficas. Isso aumenta a precisão do método e o torna uma técnica mais rápida. Phusion e Taq polimerase são duas enzimas polimerase termoestáveis produzidas comercialmente que são usadas em aplicações moleculares especiais. Phusion é uma DNA polimerase isolada de Pyrococcus furiosus e é usada principalmente em experimentos de clonagem para aumentar a fidelidade. A Taq DNA Polimerase é a DNA polimerase padrão usada na Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), e é isolada da bactéria termoestável; Termo aquático. A principal diferença entre as duas enzimas é o microrganismo fonte. Phusion é isolado do extremófilo, Pyrococcus furiosus, enquanto a Taq polimerase é isolada do termófilo, Thermus aquaticus.
O que é Phusion?
Phusion DNA polimerase é uma nova polimerase que é fabricada isolando a enzima de Pyrococcus furiosus, que é uma Archaea extremófila. Esses micróbios residem em condições de temperatura extremamente alta, tornando a polimerase uma polimerase altamente estável ao calor. A polimerase Phusion é usada para obter uma fidelidade extrema sobre a polimerase termoestável convencional; Taq polimerase. Phusion polimerase é capaz de amplificar modelos longos de até 7,5 kb de DNA genômico. A capacidade de polimerização ideal da Phusion polimerase é de 720 C. Phusion também é usado em produtos de clonagem para sequenciamento, análise de expressão e análise de mutação.
Phusion DNA polimerase tem a atividade de exonuclease 3' – 5'. Isso permite a revisão da fita recém-sintetizada após a síntese. Assim, as incompatibilidades de nucleotídeos são facilmente reparadas. Assim, tem uma menor taxa de erro. As vantagens gerais da polimerase Phusion são;
- Extrema Fidelidade
- Alta velocidade e tempo de extensão reduzido
- Reações robustas e requer otimização mínima
- Alto rendimento
Figura 01: Phusion
A principal desvantagem da Phusion polimerase é que ela é inibida na presença de desoxiuridina trifosfato (dUTP). Quando os dUTPs são acumulados na mistura de reação, podem inibir as ações da Phusion polimerase. Isso é evitado tratando a mistura de reação com dUTPase antes de adicionar a enzima. Atualmente, uma variante resistente a dUTP da polimerase Phusion conhecida como Pfu Turbo é usada em vez da polimerase Phusion como um remédio para este problema.
O que é Taq Polimerase?
Taq DNA polimerase invenção revolucionou o campo da biologia molecular. Resolveu um grande problema na amplificação de DNA. A Taq DNA polimerase é uma enzima polimerase estável ao calor extraída e isolada da bactéria termofílica Thermus aquaticus. A descoberta dessas enzimas leva ao desenvolvimento da PCR. Esta enzima permitiu o uso da reação em cadeia da polimerase na amplificação do DNA em vez das técnicas convencionais de clonagem laboriosas. A PCR agora é usada em diagnóstico molecular, campos agrícolas e industriais com muitas novas variações adicionadas à técnica.
Figura 02: Taq Polimerase
Taq DNA polimerase funciona na faixa de temperatura ideal entre 720C – 800C. A Taq DNA polimerase requer um cofator; magnésio para sua função. A Taq polimerase não tem a capacidade de revisão de 3' - 5', portanto, a taxa de erro da Taq DNA polimerase é alta em comparação com os tipos mais novos de DNA polimerase, como Phusion polimerase etc. mesmo em todo o mundo da ciência devido à conveniência e flexibilidade da enzima.
Quais são as semelhanças entre Phusion e Taq polimerase?
- As enzimas Phusion e Taq polimerase são enzimas de polimerização capazes de adicionar nucleotídeos à extremidade livre 3' da fita de DNA.
- As polimerases Phusion e Taq requerem uma sequência de primer para iniciar a polimerização.
- As polimerases Phusion e Taq são estáveis ao calor.
- As polimerases Phusion e Taq são usadas em mecanismos de PCR para amplificar o DNA.
- Ao adicionar a polimerase à mistura de reação, ambas as polimerases Phusion e Taq são adicionadas por último para garantir a eficiência da enzima.
- As polimerases Phusion e Taq são sintetizadas comercialmente para fins experimentais de biologia molecular.
- As polimerases Phusion e Taq requerem um cofator para completar sua função.
Qual é a diferença entre Phusion e Taq Polimerase?
Phusion vs Taq Polimerase |
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| Phusion é uma DNA polimerase isolada de Pyrococcus furiosus e é usada principalmente em experimentos de clonagem para aumentar a fidelidade. | Taq DNA Polimerase é a DNA polimerase padrão usada na Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), e é isolada da bactéria termoestável Thermus aquaticus. |
| Organismo Fonte | |
| Phusion é extraído de archaea extremófila – Pyrococcus furiosus. | Essas obras literárias vão desde o período da colonização até o período da descolonização. |
| Capacidade de leitura de provas | |
| 3' – 5' capacidade de leitura de prova está presente em Phusion. | 3' – a capacidade de leitura de prova de 5' está ausente na Taq polimerase. |
| Fidelidade | |
| Alta fidelidade está lá com Phusion. | Taq polimerase mostra baixa fidelidade. |
| Amplificação | |
| Phusion é capaz de amplificar longos fragmentos de DNA. | Taq polimerase é capaz de amplificar fragmentos de DNA muito mais curtos. |
| dUTP Intoxicação | |
| A ação Phusion é inibida pela acumulação ímpar. | Taq polimerase não é inibida por dUPT. |
Resumo – Phusion vs Taq polimerase
Phusion e Taq DNA polimerase são duas polimerases estáveis ao calor que são usadas em técnicas de PCR. Phusion é uma polimerase isolada do extremófilo Pyrococcus furiosus enquanto que Taq é isolado da bactéria termoestável Thermus aquaticus. A descoberta da Taq DNA polimerase leva à invenção da PCR. O Phusion tem muitas vantagens sobre o Taq, o que tornou o Phusion uma opção melhor na produção de DNA de alta fidelidade. No entanto, a Taq polimerase ainda é usada como a enzima polimerase padrão na PCR. Esta é a diferença entre Phusion e Taq polimerase.
