Diferença chave – Nitrocelulose vs Membrana de Nylon
Blotting é uma técnica importante para a detecção de sequências específicas de DNA, RNA e proteínas de suas misturas em biologia molecular. Isso é feito usando uma membrana chamada blot. Existem diferentes técnicas de blotting, como Northern, Southern e Western blotting. A seleção de uma membrana adequada para o processo de blotting deve ser feita com cuidado para evitar ligações inespecíficas e detecções erradas. Nitrocelulose, nylon e PVDF são membranas comumente usadas em técnicas de blotting. Eles têm características diferentes. A principal diferença entre a nitrocelulose e a membrana de nylon é que as membranas de nitrocelulose têm alto potencial de imobilização de proteínas, enquanto as membranas de nylon têm alto potencial de imobilização de ácidos nucleicos. No entanto, ambos os tipos de membranas são frequentemente usados em técnicas de blotting.
O que é uma membrana de nitrocelulose?
A membrana de nitrocelulose é um filtro de membrana comumente usado em técnicas de transferência de ácidos nucleicos e proteínas. Tem um alto potencial de ligação a proteínas. Assim, as membranas de nitrocelulose são amplamente utilizadas na técnica de Western blotting. As membranas de nitrocelulose são compatíveis com todas as técnicas de hibridização e apresentam capacidades de ligação superiores sem interferências. As membranas de nitrocelulose são naturalmente hidrofílicas por natureza. Eles fazem interação hidrofílica com moléculas e as imobilizam eficientemente na membrana. As membranas comerciais de nitrocelulose estão disponíveis em dois tamanhos de poro: 0,45 e 0,2 µm.
Figura 01: Membrana de nitrocelulose utilizada em western blotting
O que é uma Membrana de Nylon?
A membrana Nylon é outro tipo de membrana comercial usada em técnicas de blotting. É usado alternativamente com membranas de nitrocelulose para Southern e Northern blotting. As membranas de nylon são ideais para Southern blotting do que a nitrocelulose devido à sua alta afinidade de ligação com o DNA. Devido a várias características únicas das membranas de nylon, os pesquisadores geralmente usam membranas de nylon para Southern e Northern blotting em vez de sobre membrana de nitrocelulose. Membranas de nylon também são recomendadas para decapagem e reprovação, ao contrário da nitrocelulose.
Figura 02: Membrana de nylon usada para Southern blotting
Qual é a diferença entre Nitrocelulose e Membrana de Nylon?
Nitrocelulose vs Membrana de Nylon |
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| Membranas de nitrocelulose são quebradiças. | As membranas de nylon são menos quebradiças. |
| Manuseio | |
| Eles são difíceis de manusear. | Eles são fáceis de manusear. |
| Reprobing | |
| Membranas de nitrocelulose sem suporte são difíceis de repetir. | Reprobing é fácil com membranas de nylon. |
| Compatibilidade com várias condições de armazenamento | |
| Membranas de nitrocelulose têm menos resistência para suportar várias condições de armazenamento. | As membranas de nylon respondem de forma mais robusta a várias condições de armazenamento. |
| Usar | |
| É necessário umedecimento prévio. | A pré-umedecimento não é necessária para membranas de nylon. |
| Natureza Hidrofílica | |
| As membranas de nitrocelulose são hidrofílicas por natureza, mas são menos hidrofílicas do que as membranas de nylon. | Eles são altamente hidrofílicos por natureza. |
| Potencial de Imobilização | |
| Membranas de nitrocelulose têm menos afinidade por ácidos nucleicos. Mas tem uma alta afinidade por proteínas. | As membranas de nylon têm um alto potencial de ligação com ácidos nucleicos do que as membranas de nitrocelulose. |
Resumo – Nitrocelulose vs Membrana de Nylon
Membranas de nitrocelulose e nylon são lâminas especiais usadas na técnica de blotting para reproduzir o padrão de bandas no gel. Eles permitem a possibilidade de detectar uma sequência específica ou uma proteína das misturas, imobilizando-as na membrana. Uma vez as moléculas imobilizadas na membrana, esta pode ser utilizada como substrato para análise de hibridização com sondas marcadas. A membrana de nitrocelulose é comumente usada para detecção de proteínas na técnica de Western blotting devido à sua alta afinidade de ligação com proteínas. As membranas de nylon são frequentemente usadas para manchas do sul e do norte. Esta é a diferença entre nitrocelulose e membrana de nylon.
