Diferença Chave – Nitrocelulose vs PVDF
Western blotting é um método que permite a detecção e quantificação de proteínas específicas de uma amostra de proteína. A confiabilidade da técnica depende da seleção de uma membrana correta para absorção das proteínas do gel. Existem diferentes tipos de membranas microporosas. As membranas de nitrocelulose e PVDF são duas dessas membranas preferidas pelos pesquisadores devido aos seus atributos especiais em relação aos outros tipos de membranas. A seleção entre a nitrocelulose ou PVDF também é outro desafio no Western blotting. Tanto a nitrocelulose quanto o PVDF possuem alta capacidade de absorção de proteínas. A principal diferença entre a membrana de nitrocelulose e PVDF é que as membranas de nitrocelulose não têm a capacidade de remover anticorpos e reutilizar a membrana para reprovação de anticorpos, enquanto as membranas de PVDF têm capacidade de remoção e reutilização.
O que é Nitrocelulose?
Nitrocelulose é um polímero fabricado pelo tratamento de celulose com ácido nítrico e é usado para fazer membranas microporosas em biologia molecular, especialmente para técnicas de blotting como Southern, Northern e Western blotting. Os tamanhos dos poros das membranas de nitrocelulose variam de 3 a 20 µm. As membranas microporosas de nitrocelulose facilitam a detecção da reação imunoquímica que ocorre na superfície da membrana. Portanto, membranas de nitrocelulose são frequentemente usadas para imobilização de proteínas e detecção de proteínas específicas em Western blotting. As membranas de nitrocelulose também podem imobilizar glicoproteínas e ácidos nucleicos.
Membranas de nitrocelulose são preferidas em ensaios de fluxo lateral devido a várias características. As membranas de nitrocelulose absorvem proteínas em alta concentração. O solvente usado para molhar a membrana não diminui a absorção da proteína da membrana de nitrocelulose. As membranas de nitrocelulose podem ser facilmente cortadas no tamanho de gel desejado e transferir proteínas do gel para a membrana por transferência elétrica ou capilar. A nitrocelulose permite um fluxo mais rápido de proteínas através da membrana com alto potencial de ligação. A nitrocelulose apresenta uma maior resistência ao manuseio. Outro atributo especial da membrana de nitrocelulose é que ela pode ser facilmente colada com adesivos não solventes resistentes à água em vários suportes plásticos.
Figura 01: Membrana de nitrocelulose para Western blotting
O que é PVDF?
Difluoreto de polivinilideno (PVDF) é um fluoropolímero produzido pela polimerização do difluoreto de vinilideno e possui alta capacidade de imobilização de proteínas. Portanto, membranas microporosas feitas de PVDF são usadas em técnicas de Western blotting para analisar proteínas específicas das misturas de proteínas. As membranas de PVDF também podem ser usadas para análise de aminoácidos e sequenciamento de proteínas. A característica mais importante da membrana de PVDF sobre a membrana de nitrocelulose é que ela pode ser facilmente removida dos anticorpos e reutilizada para sondas de anticorpos subsequentes.
As membranas PVDF são mais espessas que as membranas de nitrocelulose; portanto, mais resistente a danos durante a reutilização. As membranas de PVDF são altamente hidrofóbicas. Portanto, eles devem ser embebidos em metanol ou isopropanol antes do uso.
Qual é a diferença entre Nitrocelulose e PVDF?
Nitrocelulose vs PVDF |
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| Nitrocelulose é um polímero composto de celulose. | PVDF é um fluoropolímero produzido pela polimerização do difluoreto de vinilideno. |
| Tamanho do Poro da Membrana | |
| Os tamanhos típicos dos poros são 0,1, 0,2 ou 0,45μ | Os tamanhos típicos dos poros são 0,1, 0,2 ou 0,45μm |
| Capacidade de ligação de proteínas | |
| Nitrocelulose tem uma capacidade de ligação a proteínas de 80 a 100 μg/cm2. | PVDF tem uma capacidade de ligação a proteínas de 170 a 200 μg/cm2. |
| Sensibilidade | |
| Isso tem uma sensibilidade baixa em comparação com PVDF. | Isso tem uma alta sensibilidade. |
| Detecção de proteínas pouco expressas | |
| Como a sensibilidade é baixa em membranas de nitrocelulose, não é adequado para detecção de proteínas de baixa expressão. | Isso é mais adequado para a detecção de proteínas de baixa expressão devido à sua alta sensibilidade. |
| Ruído de fundo | |
| Isso tem menor ruído de fundo | Isso tem um ruído de fundo mais alto. |
| Interações com Proteínas | |
| As moléculas de proteína se ligam às membranas de nitrocelulose por meio de interações hidrofóbicas. | Proteínas se ligam às membranas de PVDF por meio de interações hidrofóbicas e dipolo. |
| Natureza da Membrana | |
| A nitrocelulose é quebradiça e frágil. No entanto, existem versões de nitrocelulose que são resistentes. | PVDF é mais durável e tem maior resistência química. |
| Capacidade de Tirar e Reutilizar | |
| Nitrocelulose pode ter dificuldade em descascar e reprovar sem perder o sinal. | PVDF é ideal para reprovação e sequenciamento de aplicativos. |
| Adequação | |
| A nitrocelulose é ideal para detectar proteínas de baixo peso molecular. | PVDF é mais adequado para detectar proteínas de maior peso molecular. |
| Outros Usos | |
| Nitrocelulose pode ser usada para análise de ácido nucleico e mancha de ponto/ranhura. | PVDF pode ser usado para sequenciamento de proteínas e sistemas de ensaio de fase sólida. |
| Custo | |
| Isso é mais barato que as membranas de PVDF. | Isso é mais caro que as membranas de nitrocelulose. |
| Necessidade de pré-umedecimento | |
| Membranas de nitrocelulose não requerem pré-embebição com metanol | Membranas de PVDF requerem pré-embebição com metanol. |
Resumo – Nitrocelulose vs PVDF
Membranas de nitrocelulose foram as primeiras membranas utilizadas comercialmente para ensaio de fluxo lateral. Eles têm uma alta capacidade de absorção de proteínas. Portanto, membranas de nitrocelulose são usadas em Western blotting. O PVDF é outro tipo de membrana usado em western blotting e também possui alta capacidade de absorção de proteínas. Ambos os tipos são usados em Western blotting para análise de proteínas. No entanto, as membranas de PVDF têm atributos mais especiais, tornando-as mais adequadas do que as membranas de nitrocelulose para western blotting. Mas, as membranas de nitrocelulose são mais adequadas para detectar proteínas de baixo peso molecular, as membranas de PVDF são mais adequadas para detectar proteínas de alto peso molecular. Esta é a diferença entre as membranas de nitrocelulose e PVDF.
