Diferença de chave – página SDS vs página nativa
SDS e página nativa são dois tipos de técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida usadas em Biologia Molecular. A principal diferença entre SDS Page e Native Page é o tipo de gel de poliacrilamida usado. No SDS Page é usado um gel desnaturante, portanto, as moléculas são separadas com base em seu peso molecular. Em contraste, em Native Page, são usados géis não desnaturantes. Portanto, as moléculas são separadas com base em seu tamanho, carga e forma.
A Eletroforese em Gel de Poliacrilamida (Page) usa um gel feito pela polimerização de monômeros de acrilamida com metileno bisacrilamida. A poliacrilamida é mais resistente e mais estável ao calor do que a agarose. Os géis de poliacrilamida têm um tamanho de poro menor que permite a separação eficiente de proteínas. Existem dois tipos principais de configurações de página, a saber, página SDS e página nativa. A eletroforese em gel SDS Page ou Sodium-Dodecil Sulfate Polyacrylamide separa as proteínas com base em seus pesos moleculares. Géis desnaturantes são usados em SDS Page. Native Page usa géis não desnaturantes e separa as proteínas com base em seu tamanho, carga e forma (conformação 3D).
O que é página SDS?
SDS Page é a técnica eletroforética mais comum usada para separar proteínas com base em seu peso molecular. O gel é feito pela adição de SDS (dodecil sulfato de sódio), que é um detergente. SDS dentaduras proteínas em monômeros. SDS é um detergente aniônico. Portanto, adiciona uma carga líquida negativa às proteínas dentro de uma ampla faixa de pH. Quando a carga líquida negativa é transmitida às moléculas de proteína, devido à variação de carga, as estruturas complexas são quebradas. Devido à carga negativa, as proteínas atraem para o lado positivo. Assim, as moléculas de menor peso molecular viajam mais rápido na matriz do gel e podem ser observadas próximas ao ânodo, enquanto as proteínas de maior peso molecular são observadas mais próximas dos poços.
Figura 01: Página SDS
A ligação do SDS à cadeia polipeptídica é proporcional à sua massa molecular relativa. Portanto, a massa molecular também pode ser determinada via SDS Page. A coloração dos géis SDS Page é feita por coloração com azul de bromofenol. As aplicações do SDS variam em maior extensão, onde ele pode ser usado para estimar a massa molecular relativa e para determinar a abundância relativa de proteínas em uma mistura de proteínas. A página SDS também pode ser usada para determinar a distribuição de proteínas em uma mistura de proteínas. O SDS Page também é aplicado para purificar e avaliar proteínas. É usado como um procedimento preliminar para Western blotting e hibridização, que por sua vez é usado para mapeamento e identificação de proteínas.
O que é página nativa?
Native A eletroforese em gel de poliacrilamida (Native Page) usa um gel não desnaturante. Portanto, SDS ou qualquer outro agente desnaturante não é adicionado à matriz de gel. Na página nativa, a separação de proteínas é baseada na carga e no tamanho da proteína. Portanto, a mobilidade da proteína depende da carga e do tamanho da proteína.
A carga da proteína depende das cadeias laterais dos aminoácidos. Se as cadeias laterais estiverem carregadas negativamente, a proteína receberá uma carga geral negativa e vice-versa. As proteínas retêm uma conformação 3D devido ao dobramento que ocorre. O dobramento resulta de vários tipos de ligações em proteínas, como ligações dissulfeto, interações hidrofóbicas e ligações de hidrogênio. Portanto, se a página nativa for transportada em pH neutro, as proteínas serão separadas de acordo com a forma molecular da proteína. Portanto, a página nativa pode ser usada como uma técnica sensível para detectar a mudança na carga ou conformação da proteína.
A principal vantagem da página nativa é que a proteína usada para a análise da página pode ser recuperada em seu estado original após a análise da página, pois a proteína não é perturbada durante o processo. A página nativa é uma técnica de rendimento relativamente alto, e a estabilidade da proteína é aumentada.
Figura 02: Página nativa
Após a conclusão da execução do gel, o gel Native Page pode ser visualizado por coloração com azul de bromofenol ou qualquer outro reagente de coloração adequado. As aplicações do Native Page incluem a separação de proteínas ácidas incluindo glicoproteínas como a eritropoietina recombinante humana ou a identificação de proteínas presentes na albumina sérica bovina (BSA).
Quais são as semelhanças entre a página SDS e a página nativa?
- Os sistemas SDS Page e Native Page usam gel de poliacrilamida como matriz do gel.
- Ambos são usados para separação e identificação de proteínas.
- Ambos usam mobilidade eletroforética para separar os compostos.
- Ambos podem ser feitos de maneira vertical ou horizontal (principalmente como configurações de página verticais porque o comprimento da execução é maior).
- O aparelho de eletroforese, incluindo o tanque de gel, pentes, a fonte de alimentação é necessário para o funcionamento de ambas as técnicas.
- A visualização do gel pode ser feita por métodos de coloração em ambas as técnicas.
Qual é a diferença entre página SDS e página nativa?
Página SDS vs Página Nativa |
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| SDS Page ou Sodium-dodecil sulfato Page separa as proteínas com base em seu peso molecular e usa um gel desnaturante. | Native Page usa géis não desnaturantes e separa as proteínas com base em seu tamanho, carga e forma (conformação 3D). |
| Tipo de Gel | |
| Um gel desnaturante é usado na página SDS. | Um gel não desnaturante é usado na página nativa. |
| Presença de SDS | |
| SDS está presente como um detergente para conferir uma carga negativa na amostra na página SDS. | SDS não está presente na página nativa. |
| Base de Separação | |
| A separação das proteínas depende do peso molecular da proteína na página SDS. | A separação depende do tamanho e da forma da molécula de proteína na página nativa. |
| Estabilidade da Proteína | |
| Estabilidade da proteína é baixa na página SDS. | Estabilidade da proteína é alta na página nativa. |
| Recuperação da Proteína Original | |
| Não é possível, pois está desnaturado na página SDS. | Possível na página nativa. |
Resumo – Página SDS vs Página Nativa
SDS Page e Native Page são dois tipos de técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida usadas para separar proteínas. O SDS Page é tratado com um detergente chamado SDS. O SDS confere uma carga geral negativa à proteína, o que resulta na desnaturação da proteína. Portanto, as proteínas são separadas com base em seu peso molecular. Em contraste, a técnica Native Page não usa nenhum agente desnaturante. Assim, as proteínas são separadas com base em seu tamanho ou na forma. Esta é a diferença entre a página SDS e a página nativa.
