Diferença chave – página SDS vs Western Blot
Western blotting é uma técnica que detecta uma proteína específica de uma amostra de proteína. Esta técnica é realizada através de várias etapas principais: eletroforese em gel, blotting e hibridização. A eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio (SDS Page) é um tipo de técnica de eletroforese em gel que é usada para separar proteínas de acordo com seus tamanhos (pesos moleculares). Western blot é uma folha especial de uma membrana de blotting que é usada para transferir o mesmo padrão das proteínas na página SDS. A principal diferença entre SDS Page e western blot é que o SDS Page permite a separação de proteínas em uma mistura, enquanto o western blot permite a detecção e quantificação de uma proteína específica de uma mistura. Ambos são úteis em estudos de análise de proteínas.
O que é página SDS?
SDS Page é uma técnica de eletroforese em gel usada para separação de proteínas. É comumente usado em bioquímica, genética, forense e biologia molecular. Uma vez que as proteínas são extraídas da amostra, elas são executadas em um gel composto de SDS e poliacrilamida. SDS é um detergente aniônico que é usado para linearizar proteínas (proteínas desnaturadas) e para conferir uma carga negativa a proteínas linearizadas proporcional à sua massa molecular. A poliacrilamida torna-se o suporte sólido para o gel. As proteínas desnaturadas que são carregadas negativamente migram para a extremidade positiva do aparelho através do gel. De acordo com os tamanhos das proteínas, as velocidades de migração diferem entre as proteínas e ocorre a separação. Portanto, a página SDS é útil para a separação de proteínas individuais com base em seus tamanhos.
A preparação do gel de poliacrilamida para o fracionamento de proteínas é uma etapa crucial na SDS Page. A concentração correta de poliacrilamida e o tipo de agente de reticulação utilizado afetam fortemente as propriedades físicas do gel, o que dificulta a separação real das diferentes proteínas. Os tamanhos dos poros do gel devem ser gerenciados adequadamente para uma separação eficaz. No entanto, o SDS Page é considerado uma técnica de separação de proteínas de alta resolução.
SDS A técnica de página tem uma grande limitação na análise de proteínas. Como o SDS desnatura as proteínas antes da separação, ele não permite a detecção de atividade enzimática, interações de ligação de proteínas, cofatores de proteínas, etc.
Figura 01: Página SDS
O que é Western Blot?
A técnica de Western blotting permite a detecção de uma proteína específica de uma mistura de proteínas e a medição da quantidade e peso molecular da proteína. Western blot é a membrana usada durante o procedimento de blotting para obter a imagem espelhada dos padrões de proteína no gel de SDS-poliacrilamida. A membrana que é usada para Western blotting é composta principalmente de nitrocelulose ou difluoreto de polivinilideno (PVDF). A membrana com a proteína transferida pode ser usada para identificar a proteína desejada. Requer anticorpo de alta qualidade para a detecção da proteína desejada por hibridização. O anticorpo se liga ao seu antígeno específico e revela a presença do antígeno desejado que é uma proteína.
A transferência das proteínas do gel de poliacrilamida SDS para o western blot é realizada por eletroblotting. É um método eficaz e rápido que faz com que as proteínas sejam eletroforeses para fora do gel e passem para a membrana de nitrocelulose (Western blot).
Figura 02: Western Blot
Qual é a diferença entre SDS Page e Western Blot?
Página SDS vs Western Blot |
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| SDS Page é uma técnica de eletroforese em gel. | Western blot é uma técnica que é realizada em uma membrana para detectar uma proteína específica de uma mistura. |
| Usar | |
| A página SDS permite a separação de proteínas de acordo com seus tamanhos. | Western blot permite a transferência de proteínas no gel da página SDS sem alterar seu padrão e permite a hibridização com anticorpos específicos. |
| Desvantagens | |
| Desnaturação de proteínas, alto custo e presença de neurotoxinas químicas são as desvantagens desta técnica. | Esta técnica é demorada e requer uma boa experiência pessoal e condições controladas específicas. |
Resumo – Página SDS vs Western Blot
SDS page e western blot são dois métodos envolvidos na análise de proteínas. O SDS Page permite a fácil separação de proteínas em um gel de acordo com seu peso molecular. Western blot ajuda a confirmar a presença e a quantidade de uma proteína específica através da hibridização com anticorpos específicos. Esta é a diferença entre SDS Page e western blot.
