Diferença chave – Papel vs Camada Fina vs Cromatografia em Coluna
A cromatografia em papel, a cromatografia em camada fina e a cromatografia em coluna são três tipos de técnicas cromatográficas. A principal diferença entre cromatografia em papel, cromatografia em camada fina e cromatografia em coluna é baseada no tipo de fase estacionária usada na técnica de cromatografia. A cromatografia em papel usa um papel de celulose como fase estacionária, a cromatografia em camada fina usa alumina ou sílica gel como fase estacionária, enquanto a cromatografia em coluna usa uma coluna empacotada com um material de matriz adequado como fase estacionária.
No processo de separação e identificação de biomoléculas como proteínas e carboidratos, a cromatografia é uma importante técnica biofísica utilizada. A cromatografia separa os compostos com base em sua solubilidade, tamanho e carga. Com base no mecanismo de separação, a cromatografia utiliza mecanismos como troca iônica, absorção, partição e exclusão de tamanho e existem três técnicas cromatográficas; ou seja, papel, camada fina e cromatografia em coluna. A cromatografia em papel baseia-se na adsorção sólido-líquido e na solubilidade do composto, e utiliza um papel de celulose como fase estacionária. A cromatografia em camada fina é baseada na adsorção sólido-líquido de moléculas. Possui uma fase estacionária que é tipicamente feita de alumina ou sílica gel e a fase móvel que é o solvente. A cromatografia em coluna usa uma coluna empacotada com uma matriz que é usada para separar moléculas principalmente com base em seu tamanho, afinidade ou carga.
O que é Cromatografia em Papel?
A cromatografia em papel é o tipo mais simples de cromatografia usado e não é usado para pesquisas extensas. É usado principalmente em laboratórios de estudantes para identificar biomoléculas como aminoácidos e carboidratos presentes em misturas. A cromatografia em papel utiliza uma fase estacionária que é feita com papel de celulose ou papel de filtro Whatman e uma fase móvel que geralmente é preparada com solventes orgânicos como n-butanol, etc. A fase estacionária é saturada com água, tornando a fase estacionária líquida. Assim, quando os compostos são manchados e deixados correr na presença da fase móvel, dependendo da solubilidade dos compostos, eles são separados. Assim, após o desenvolvimento do cromatograma, a coloração pode ser feita para determinar o percurso do comprimento de cada composto. O fator de retenção pode assim ser calculado.
Figura 01: Cromatografia em Papel
A cromatografia em papel pode ser classificada como cromatografia em papel ascendente e cromatografia em papel descendente, dependendo da direção do solvente em execução.
O que é Cromatografia em Camada Fina?
A cromatografia em camada fina ou TLC é uma técnica comumente usada para identificar diferentes aminoácidos presentes em uma mistura ou para a identificação de proteínas. A técnica de separação é baseada na adsorção sólido-líquido. Durante a cromatografia em camada fina, uma placa feita de alumina ou gel de sílica é usada como fase estacionária. A mistura de solventes varia de acordo com a necessidade e pode usar diferentes combinações de compostos orgânicos, como n-butanol, ácido acético e água para preparar o solvente. Os compostos a serem separados são manchados na placa e imersos na mistura de solventes. Uma vez que o solvente sobe com base na ação capilar dada pela placa, os compostos manchados na placa também se movem dependendo de sua solubilidade no solvente.
Figura 02: Cromatografia em Camada Fina
A detecção das manchas após a execução do cromatograma é feita por diferentes procedimentos de coloração. Alguns usam coloração com ninidrina, que é um método bastante tóxico de coloração. Os cromatogramas de camada fina modernos usam técnicas de fluorescência para visualizar o cromatograma após a execução. Dependendo das distâncias percorridas, o tempo de retenção de cada composto pode ser calculado. Isso pode ser usado para identificar o tipo de composto separado com base na mistura usada. TLC é usado principalmente para identificar aminoácidos em uma mistura de proteínas e também para separar diferentes tipos de monossacarídeos presentes em uma mistura.
O que é Cromatografia em Coluna?
cromatografia em coluna é um termo amplo usado para descrever muitos tipos de técnicas de cromatografia que usam o método de separação baseado em coluna. Na cromatografia em coluna, uma coluna física é usada com um material de embalagem para separar os compostos. A separação pode ser baseada em diferentes propriedades físicas exibidas pelos compostos. Essas propriedades podem ser a carga, tamanho, conformação 3D e capacidade de ligação, etc. Assim, a coluna empacotada com o material da matriz atua como a fase estacionária e o tampão de lavagem aplicado à coluna atua como a fase móvel.
Se as moléculas são separadas com base no tamanho, o material de embalagem é embalado de forma a deixar poros para os compostos passarem. Assim, as moléculas maiores que não podem fluir pelos poros são eluídas primeiro, enquanto as moléculas menores levam muito mais tempo para eluir.
Figura 03: Cromatografia em Coluna
Se as moléculas forem separadas com base em sua carga, a fase estacionária conterá um trocador aniônico ou catiônico para o qual os compostos serão atraídos com base em sua carga. Assim, durante a etapa de lavagem, os compostos não ligados serão eluídos. Ao adicionar o tampão de eluição, os compostos carregados ligados serão eluídos. A detecção desses eluentes é baseada principalmente em técnicas espectrofotométricas.
Quais são as semelhanças entre camada fina de papel e cromatografia em coluna?
- All Paper Thin Layer e Cromatografia em Coluna três técnicas são usadas para separação de biomoléculas como aminoácidos, proteínas e carboidratos.
- As técnicas de cromatografia de coluna e camada fina de papel têm uma fase móvel e uma fase estacionária.
- As técnicas de camada fina de papel e cromatografia em coluna usam mecanismos biofísicos para separação.
Qual é a diferença entre camada fina de papel e cromatografia em coluna?
Papel vs Camada Fina vs Cromatografia em Coluna |
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| Cromatografia em Papel | A cromatografia em papel é uma técnica cromatográfica usada para separar compostos com base na adsorção líquido-líquido e na solubilidade do composto. Utiliza um papel de celulose como fase estacionária. |
| Cromatografia em Camada Fina | A cromatografia em camada fina é outra técnica cromatográfica baseada na adsorção sólido-líquido de moléculas. Possui uma fase estacionária feita de alumina ou sílica gel e um solvente como fase móvel, que é o solvente. |
| Cromatografia em Coluna | A cromatografia em coluna usa uma coluna empacotada com uma matriz que é usada para separar moléculas principalmente com base em seu tamanho, afinidade ou sua carga. |
| Fase Estacionária | |
| Cromatografia em Papel | Papel feito de nitrocelulose de Whatman é usado como fase estacionária na cromatografia em papel. |
| Cromatografia em Camada Fina | Alumina ou gel de sílica é usado como a fase estacionária da cromatografia em camada fina. |
| Cromatografia em Coluna | Uma coluna empacotada com material de embalagem adequado é usada como fase estacionária na cromatografia em coluna. |
| Mobile Phase | |
| Cromatografia em Papel | O solvente em execução é a fase móvel da cromatografia em papel. |
| Cromatografia em Camada Fina | O solvente em execução é a fase móvel da cromatografia em camada fina. |
| Cromatografia em Coluna | O tampão de lavagem é a fase móvel da cromatografia em coluna. |
| Mecanismos Usados para Separação | |
| Cromatografia em Papel | A cromatografia em papel é baseada na absorção sólido-líquido. |
| Cromatografia em Camada Fina | A cromatografia em camada fina é baseada na absorção sólido-líquido. |
| Cromatografia em Coluna | A cromatografia em coluna é baseada na exclusão de tamanho, carga e forma. |
| Tampão de Eluição | |
| Cromatografia em Papel | Não é necessário para cromatografia em papel. |
| Cromatografia em Camada Fina | Não é necessário para cromatografia em camada fina. |
| Cromatografia em Coluna | Requerido em cromatografia em coluna. |
| Detecção | |
| Cromatografia em Papel | coloração e determinando o fator de retenção. |
| Cromatografia em Camada Fina | coloração e determinando o fator de retenção. |
| Cromatografia em Coluna | Determinação espectrofotométrica. |
Resumo – Camada Fina de Papel vs Cromatografia em Coluna
A cromatografia em papel, TLC e cromatografia em coluna são técnicas de separação utilizadas para separar biomoléculas como proteínas, aminoácidos e carboidratos (principalmente monossacarídeos). A cromatografia em papel usa um papel de celulose como fase estacionária, e o mecanismo de separação é baseado na adsorção sólido-líquido. O TLC também usa mecanismos de adsorção sólido-líquido. As moléculas são separadas na fase estacionária, dependendo de sua solubilidade na fase móvel. A cromatografia em coluna usa propriedades físicas como tamanho, forma, carga e peso molecular do composto para separar. A coluna empacotada com o material da matriz atua como a fase estacionária, enquanto o tampão de lavagem atua como a fase solvente. Esta é a diferença entre uma camada fina de papel e cromatografia em coluna.
