Diferença Chave - Eletroforese Capilar vs Eletroforese em Gel
Eletroforese é uma técnica que é usada para separar biomoléculas com base na carga da partícula, tamanho da partícula e forma da partícula. A migração da molécula, conhecida como mobilidade eletroforética, depende do tipo de polímero/gel utilizado, do tamanho dos poros, da voltagem fornecida, do tempo de execução e da relação superfície/volume. Existem diferentes tipos de técnicas de eletroforese com base no tipo de biomolécula utilizada. O primeiro tipo de eletroforese inventado foi a eletroforese de papel onde um papel de nitrocelulose foi usado como meio para separação de biomoléculas. O princípio da eletroforese em gel, onde géis de diferentes tamanhos de poros eram usados para separar biomoléculas, foi inventado mais tarde. A técnica de eletroforese em gel foi modificada para melhorar a precisão da técnica, e uma dessas modificações é a eletroforese capilar. A principal diferença entre a eletroforese capilar e a eletroforese em gel é que a eletroforese em gel é realizada em um plano vertical ou horizontal usando um gel de polímero de tamanho de poro padrão, enquanto a eletroforese capilar é realizada em um tubo capilar com um líquido de polímero ou um gel.
O que é Eletroforese em Gel?
A eletroforese em gel é uma técnica usada para separar principalmente ácidos nucléicos, proteínas ou aminoácidos com base em sua carga, tamanho e forma. Esta técnica utiliza um gel físico, que é uma substância polimérica, como meio de separação. Os géis mais comumente utilizados são agarose (para separação de ácidos nucleicos) e poliacrilamida (para separação de proteínas). O aparelho de eletroforese em gel contém a bandeja de fundição de gel para preparar o gel, pentes de fundição para preparar os poços, tanque tampão, eletrodos – positivo (ânodo) e negativo (cátodo) e a unidade de alimentação de tensão. Moléculas como DNA ou RNA, que são carregadas negativamente, movem-se do cátodo para o ânodo e moléculas que são carregadas positivamente movem-se vice-versa. A preparação do gel é feita de acordo com a necessidade. Se for necessária uma alta resolução ou separação de moléculas, deve ser preparado um gel de alta concentração com um tamanho de poro menor. As moléculas separadas na matriz de gel são observadas após uma técnica de coloração. As moléculas separadas aparecem como bandas na matriz do gel.
Figura 01: Eletroforese em Gel
A eletroforese em gel é usada em diagnósticos moleculares, como impressão digital de DNA para determinar a presença de um fragmento de DNA/RNA ou uma proteína em particular. A eletroforese em gel também determina a pureza da amostra de biomolécula extraída. A eletroforese em gel é realizada como uma etapa preliminar para a hibridização e como uma análise confirmatória após o sequenciamento.
O que é Eletroforese Capilar?
Eletroforese capilar é uma modificação da eletroforese em gel que usa o mesmo princípio de separação baseado na carga, tamanho da molécula, mas é realizada em um tubo capilar com uma substância em gel ou um polímero líquido. Os capilares são preparados de sílica fundida, e cada tubo capilar tem um diâmetro interno de 50-100μm e 25-100cm de comprimento. As amostras são injetadas no tubo capilar contendo o material polimérico e são separadas muito mais rapidamente do que a eletroforese em gel convencional. O sistema capilar está bem protegido dentro de uma capa isolante que protege a amostra de qualquer contaminação. Os capilares podem ser preenchidos com polímeros líquidos, como hidroxietilcelulose ou géis de alta resolução, como poliacrilamida. A eletroforese capilar proporciona maior resolução; portanto, a separação é mais precisa. A eletroforese capilar usa um sistema detector automatizado por meio de análise espectrofotométrica. Isso se deve à maior razão entre área de superfície e volume.
Figura 02: Eletroforese Capilar
A eletroforese capilar é usada em situações como na área forense, onde é necessária maior precisão e não é comumente usada, pois é uma técnica cara.
Quais são as semelhanças entre a eletroforese capilar e a eletroforese em gel?
- A separação de moléculas em ambas as técnicas é baseada na carga e no tamanho da molécula.
- Ambas as técnicas podem ser usadas para separar ácidos nucléicos e proteínas.
- O volume de amostra de ambas as técnicas é o mesmo.
- Ambas as técnicas usam um buffer para facilitar a separação.
Qual é a diferença entre eletroforese capilar e eletroforese em gel?
Eletroforese Capilar vs Eletroforese em Gel |
|
| Eletroforese capilar é uma técnica que separa biomoléculas em um tubo capilar usando um meio polimérico líquido ou gel. | A eletroforese em gel é uma técnica que separa biomoléculas em um plano vertical ou horizontal usando um meio de gel polimérico. |
| Separação | |
| Na eletroforese capilar, a separação é feita dentro de um tubo capilar. | Na eletroforese em gel, a separação é feita no plano vertical ou horizontal. |
| Meio de Separação | |
| Polímeros líquidos como hidroxietilcelulose são usados na eletroforese capilar. | Géis, agarose ou poliacrilamida, são usados como meio na eletroforese em gel. |
| Cross Linkage | |
| Alta resolução pode ser obtida por eletroforese capilar. | A resolução é baixa em eletroforese em gel. |
| Relação entre a área da superfície e o volume | |
| A relação superfície/volume é alta na eletroforese capilar. | A relação superfície/volume é baixa na eletroforese em gel. |
| Técnica de Detecção | |
| A detecção é feita através de detectores espectrofotométricos automatizados em eletroforese capilar. | A coloração e observação através do transiluminador UV são feitas como técnicas de detecção em eletroforese em gel. |
Resumo – Eletroforese Capilar vs Eletroforese em Gel
O diagnóstico molecular desempenha um papel importante no mundo científico. A identificação e purificação de DNA, RNA e proteínas são etapas críticas nos procedimentos de diagnóstico. A eletroforese é uma técnica que separa e identifica biomoléculas tanto na eletroforese em gel quanto na eletroforese em gel capilar muito avançada. A eletroforese em gel é realizada em um plano vertical ou horizontal usando um gel de polímero de tamanho de poro padrão, enquanto a eletroforese capilar é realizada em um tubo capilar com um líquido de polímero ou um gel. Esta é a diferença entre eletroforese capilar e eletroforese em gel. Após a conclusão da técnica de eletroforese, as biomoléculas são posteriormente processadas para obter informações de nível superior por meio de hibridização ou por meio de técnicas como impressão digital.
Baixe a versão em PDF de Eletroforese Capilar vs Eletroforese em Gel
Você pode baixar a versão em PDF deste artigo e usá-lo para fins offline conforme nota de citação. Faça o download da versão em PDF aqui Diferença entre eletroforese em gel e eletroforese capilar.
