Key Difference – Gel de Empilhamento vs Gel de Separação
Os termos gel de empilhamento e gel de separação são usados para explicar a técnica SDS-PAGE. SDS-PAGE ou eletroforese em gel de dodecil sulfato de sódio-poliacrilamida é uma técnica de laboratório que é usada para separar moléculas de proteínas com base em seus pesos moleculares. A teoria por trás da técnica é que proteínas com diferentes pesos moleculares apresentam diferentes taxas de migração; moléculas de baixo peso molecular migram mais rapidamente, enquanto moléculas de alto peso molecular migram lentamente. O meio para migração é um gel. Existem dois tipos de géis denominados como gel de empilhamento e gel de separação. A principal diferença entre o gel de empilhamento e o gel de separação é que o pH do gel de empilhamento é 6,8, enquanto o pH do gel de separação é 8,8.
O que é gel de empilhamento?
Gel de empilhamento é um gel de poliacrilamida de baixa concentração que é colocado no topo de um gel de resolução mais concentrado (gel separador) na técnica SDS-PAGE. O gel de empilhamento é usado para melhorar a resolução da eletroforese. A resolução aumenta devido à diferença entre as concentrações de gel de empilhamento e gel de resolução que afetam as proteínas da amostra. Como a concentração de poliacrilamida no gel de empilhamento é baixa, o tamanho dos poros é maior. Isso também ajuda a aumentar a separação.
O gel de empilhamento é um gel de poliacrilamida solto com poros grandes de cerca de 7% de poliacrilamida. Esses poros não atuam como uma barreira considerável para grandes moléculas de proteína. Portanto, este gel afeta ligeiramente a mobilidade dessas proteínas. Isso faz a separação de acordo com a mobilidade e o tamanho das proteínas, concentrando-as entre dois géis.
Figura 01: SDS-PAGE Gel de Acrilamida
O pH do gel de empilhamento é 6,8. Seu pH é ácido do que o gel de resolução por 2 unidades de pH. Este pH implica uma força iônica mais baixa, portanto, uma resistência elétrica mais alta. Isso provoca a mobilidade das proteínas do que outras partículas carregadas presentes no gel.
O que é Gel Separador?
Gel de separação ou gel de resolução de uma técnica SDS-PAGE é um gel de poliacrilamida altamente concentrado que é colocado no topo do gel de empilhamento de baixa concentração. O gel de separação contém uma grande quantidade de poliacrilamida (10%). O pH deste gel é mantido como pH=8,8, que é um nível de pH mais alto que o do gel de empilhamento.
Figura 02: Um Aparelho de Eletroforese em Gel
Quando as moléculas de proteína atingem o gel de separação, a migração dessas moléculas é retardada porque o gel de separação é um gel de alta concentração com um pequeno tamanho de poro que pode atuar como uma barreira considerável para o movimento das moléculas de proteína. Essa desaceleração permite que as outras proteínas migrem lentamente para acompanhar, resultando em uma banda estreita e concentrada entre os dois géis.
Qual é a relação entre o gel de empilhamento e o gel de separação?
Ambos os tipos de gel de empilhamento e gel de separação são usados no mesmo aparelho
Qual é a diferença entre o gel de empilhamento e o gel de separação?
Gel de Empilhamento vs Gel Separador |
|
| Gel de empilhamento é um gel de poliacrilamida de baixa concentração que é colocado no topo do gel de resolução mais concentrado (gel separador) na técnica SDS-PAGE. | Gel de separação ou gel de resolução de uma técnica SDS-PAGE é um gel de poliacrilamida altamente concentrado que é colocado no topo de um gel de empilhamento de baixa concentração. |
| Colocação | |
| O gel de empilhamento é colocado no gel de resolução (separação). | O gel de separação é colocado no fundo do recipiente usado para eletroforese em gel. |
| Concentração | |
| A concentração de gel de empilhamento é alta. | A concentração do gel separador é baixa. |
| Conteúdo de poliacrilamida | |
| O gel de empilhamento contém cerca de 7% de poliacrilamida. | Gel de separação contém cerca de 10% de poliacrilamida. |
| pH | |
| O pH do gel de empilhamento é 6,8. | O pH do gel de separação é 8,8. |
| Tamanho do Poro | |
| Grandes tamanhos de poros estão presentes no gel de empilhamento. | Poros pequenos estão presentes no gel separador. |
| Resolução | |
| Gel de empilhamento oferece melhor resolução. | Gel de separação dá uma resolução ruim. |
Resumo – Gel de Empilhamento vs Gel de Separação
Gel de empilhamento e gel de separação são dois tipos de géis de poliacrilamida usados para obter uma melhor separação de moléculas de proteína em uma determinada amostra. A diferença entre o gel de empilhamento e o gel de separação é que o pH do gel de empilhamento é 6,8, enquanto o pH do gel de separação é 8,8.
